摘要
目的：初步探究讨论雷帕霉素通过mTORC1-TFEB信号通路抑制NLRP3炎症小体改善肝脏缺血再灌注损伤相关影响及机制。 方法：动物选择健康的SD雄性大鼠36只，适应性喂养1周后随机建立3个实验组别。肝脏缺血再灌注组(模型组)：术前持续3天腹腔注入生理盐水(2.0 m1/kg·d)+肝脏缺血30min，Rapa+肝脏缺血再灌注组(药物组)：术前持续3天腹腔注入雷帕霉素药物溶液(2.0 m1/kg·d)+肝脏缺血30min，假手术实验组(对照组)：术前持续3天腹腔注入生理盐水(2.0 m1/kg·d)+开腹暴露第一肝门。分别在肝脏缺血术后24h、72h取大鼠肝脏组织用于HE染色分析肝脏组织细胞损伤程度、透射电镜分析肝细胞线粒体的超微结构变化、蛋白印迹实验(Western Blot，WB)检测p-mTORC1、TFEB和p-TFEBSer211以及LC3B、LAMP-1和NLRP3的蛋白表达情况、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定TFEB、LC3B以及LAMP-1和NLRP3的mRNA含量以及比色法和ELISA分别检验肝脏组织AST、ALT和IL-1β浓度水平。 结果：1、HE染色结果示：对照组肝脏组织在术后各时间点未见明显损伤；而药物组和模型组肝脏损伤程度在术后24h和72h均较对照组重，药物组肝损伤程度在术后两个时间点均较模型组轻；药物组和模型组术后72h肝损伤程度较术后24h减轻。2、透射电镜结果示：对照组线粒体的超微结构在术后各时间点均正常；而药物组和模型组线粒体结构损伤程度在术后24h和72h均较对照组重，药物组线粒体损伤程度在术后两个时间点均较模型组轻；药物组和模型组术后72h线粒体损伤程度较术后24h减轻。3、比色法和ELISA结果示：术后24h、72h，药物组及模型组AST、ALT、IL-1β表达水平均高于对照组，而模型组AST、ALT、IL-1β表达水平均高于药物组；术后72h药物组及模型组AST、ALT、IL-1β表达水平较术后24h降低。4、肝脏组织实时荧光定量PCR和蛋白印迹实验结果显示：术后24h时，模型组p-mTORC1的蛋白表达显著上升并高于其余两组，而药物组明显低于对照组，药物组及模型组p-TFEBSer211蛋白表达、TFEB、LC3B、LAMP-1、NLRP3 mRNA和蛋白表达均高于对照组，药物组p-TFEBSer211蛋白表达、NLRP3 mRNA和蛋白表达均低于模型组，而TFEB、LC3B、LAMP-1 mRNA和蛋白表达均高于模型组；在术后72h时，药物组p-mTORC1蛋白表达较术后24h升高而模型组p-mTORC1蛋白表达较术后24h降低，该两组TFEB、p-TFEBSer211、LC3B、LAMP-1、NLRP3 相关表达较术后24h降低。 结论：雷帕霉素通过mTORC1-TFEB信号通路促进细胞自噬-溶酶体途径的活性发生，及时缓解肝脏线粒体损伤累积，抑制炎症小体激活并减轻炎症，从而降低大鼠肝脏缺血再灌注损伤程度。
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