摘要
目的: 非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)是21世纪全球重大公共健康问题之一，全球目前尚无获批用于NASH的上市药物，因此巨大的药物市场需求驱动着对NASH新靶点的探索和对安全有效的药物研发。孕烷X受体PXR(Pregnane X receptor)为核受体转录因子超家族中的一员，大量研究发现PXR参与多种慢性肝病进程，是干预NASH及NASH肝纤维化的潜在靶标。实验室前期结果并结合本课题的研究证明柠檬苦素类化合物诺米林和黄柏酮是PXR的特异性激动剂。因此我们首先利用多种NASH及NASH肝纤维化小鼠模型，对诺米林及其类似物黄柏酮进行体内药效学评价，接着使用PXR敲除小鼠验证其抗NASH和肝纤维化的效果是通过激活PXR介导的，为找寻NASH及慢性肝病领域的新靶点和药物开发打下实验基础，也为药食同源的诺米林和黄柏酮这一类柠檬苦素类化合物的药物和保健品的开发提供指导意见。 方法: 1. 实验室前期已证明诺米林是PXR的特异性激动剂。因此我们利用双荧光素酶报告基因技术探究黄柏酮对其它核受体，如FXR、CAR、PPARγ/β/α、LXRα/β的转录活性影响，以确认黄柏酮是否是选择性激活PXR核受体。并利用药物-共结晶技术探究黄柏酮是否能与PXR直接结合。 2. 使用多种NASH小鼠模型，如MCD饲料诱导的NASH小鼠模型，CCl4诱导的肝纤维化小鼠模型以及BDL诱导的胆汁淤积性肝损伤和肝纤维化模型，探究诺米林和黄柏酮对不同原因引起的小鼠NASH及NASH肝纤维化的治疗作用。 3. 利用RNA-seq技术对BDL小鼠肝组织进行基因表达分析，并利用RT-PCR对NASH发病机制及PXR下游相关基因进行检测，以明确诺米林和黄柏酮抗NASH的分子机制。 4.建立PXR敲除鼠的BDL模型，验证诺米林和黄柏酮抗肝损伤和抗肝纤维化作用是通过激活PXR介导的。 结果: 1. 核受体的选择性验证实验证明黄柏酮选择性激活PXR转录活性，对其它核受体无影响。药物共结晶结果证明黄柏酮能与PXR直接结合，是PXR的特异性激动剂。 2. 体内药效学实验表明诺米林和黄柏酮能改善MCD饲料诱导的小鼠NASH,并减轻CCl4导致的小鼠肝损伤和氧化损伤，阻碍肝NASH纤维化进程。此外能显著改善BDL诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤和肝纤维化，并改善氧化应激。 3. RNA-seq和RT-PCR结果显示，诺米林和黄柏酮可能通过抑制肝脏炎症因子的表达、激活PXR下游CYPs、GSTs解毒酶和胆汁酸代谢相关基因的表达改善BDL诱导的肝脏炎症和肝纤维化。 4. 诺米林和黄柏酮在PXR敲除小鼠的BDL模型中失去了抗肝损伤和抗肝纤维化的作用。 结论: 基于实验室前期结果和本课题的研究证明诺米林和黄柏酮是PXR的特异性激动剂。体内药效学实验表明诺米林和黄柏酮改善MCD、CCl4和 BDL诱导的小鼠肝脏炎症、肝损伤和肝纤维化。分子机制实验表明，诺米林和黄柏酮可能通过激活PXR下游靶基因，从而抗炎、抗氧化应激并维持胆汁酸代谢平衡，进而改善NASH及NASH肝纤维化。最后利用PXR敲除鼠的BDL模型证明了诺米林和黄柏酮改善肝损伤和肝纤维的作用需通过激活PXR介导。
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