摘要
目的： 观察补肾安胎冲剂对RSA小鼠胚胎丢失率、蜕膜组织形态变化、蜕膜组织中dPRL、IGFBP-1、HIF-1α、PKM2的表达量的影响，探讨其是否通过调节有氧糖酵解促进RSA小鼠子宫内膜蜕膜化，为补肾安胎冲剂对临床保胎的指导提供更新的理论依据。 方法： 将CBA/J雌鼠与BALB/C雄鼠、CBA/J雌鼠与DBA/2雄鼠分别按2∶1比例合笼，分别建立正常妊娠模型和RSA模型[1]。合笼次日观察小鼠有无阴栓，如有，则视为妊娠0天。将正常妊娠组设为ZC组，RSA小鼠按随机原则分为模型组(MX组)，中药低(L)、中(M)、高剂量(H)组及西药组(XY组)。MX组小鼠采用蒸馏水灌胃;L、M、H组采用补肾安胎冲剂灌胃，剂量分别为3.9mg·kg/d、11.7mg·kg/d、35.1mg·kg/d;XY组小鼠采用黄体酮水溶液灌胃，剂量为26mg kg/d。所有用药组连续灌胃8天。末次给药24小时后，处死孕鼠，计算胚胎丢失率;采用HE染色法分析各组小鼠的蜕膜组织形态，用Elisa法检测小鼠蜕膜组织中dPRL、IGFBP-1的表达情况，用免疫荧光法检测小鼠蜕膜组织中HIF-1α、PKM2蛋白的表达情况、RT-qPCR技术检测小鼠蜕膜组织中HIF-1α、PKM2RNA的表达情况，并对检测结果进行统计分析。 结果： 3.1比较各组小鼠胚胎丢失率 与ZC组相比，MX组小鼠胚胎丢失率显著提高(P＜0.01);与MX组相比，L、M、H、XY组小鼠胚胎丢失率显著降低(P＜0.01);与H组相比，L、M组小鼠胚胎丢失率明显提高(P＜0.01)，XY组小鼠胚胎丢失率未见明显差异(P＞0.05)。 3.2比较HE染色各组小鼠蜕膜组织形态变化 实验结果显示，光镜下ZC组小鼠蜕膜完整，呈砖状镶嵌排列，腺体丰富，胞浆染色均匀，细胞核圆形或椭圆形。与ZC比较，MX组小鼠蜕膜组织的形态破裂，蜕膜细胞的数量明显减少，细胞排列更加紊乱。在蜕膜细胞中，细胞质水肿更明显，细胞核减少，染色更深[2]。与MX组比较，各给药组蜕膜细胞数量增加，排列明显更加有序，细胞质水肿减少，而且随着剂量的增加，细胞质逐渐富集，细胞核形态好转，蜕膜组织形态逐渐改善。H组与XY组蜕膜形态无明显差异。结果表明，RSA小鼠蜕膜组织形态被破坏。补肾安胎冲剂干预后，蜕膜细胞得到改善，为胚胎发育提供更好的基础。 3.3比较免疫荧光法检测各组小鼠蜕膜组织HIF-1α、PKM2蛋白的表达情况 用Case Viewer软件观察组织荧光染色情况，细胞核呈蓝色，阳性表达呈绿色荧光。MX组较ZC组小鼠蜕膜组织HIF-1α、PKM2蛋白的表达显著下降(P＜0.01);各用药组较MX组小鼠蜕膜组织HIF-1α、PKM2蛋白的表达明显升高(P＜0.01);M、L组较H组蜕膜组织HIF-1α、PKM2蛋白的表达明显下降(P＜0.01);H组和XY组的蜕膜组织HIF-1α、PKM2蛋白的表达未见明显差异(P＞0.05)。 3.4比较ELisa法检测各组小鼠蜕膜组织dPRL、IGFBP-1的表达情况 MX组较ZC组小鼠蜕膜组织dPRL、IGFBP-1的表达量明显降低(P＜0.01);各用药组较MX组小鼠蜕膜组织的dPRL、IGFBP-1的表达量明显提高(P＜0.01);M、L组较H组的dPRL、IGFBP-1表达量明显降低(P＜0.01);H组和XY组的dPRL表达量未见明显差异(P＞0.05)，H组和XY组的IGFBP-1表达量有差异，差异有统计学意义(P＜0.05)。 3.5比较RT-qPCR法检测各组小鼠蜕膜组织HIF-1α、PKM2mRNA的表达情况 MX组较ZC组小鼠蜕膜组织HIF-1α、PKM2mRNA的表达显著下降(P＜0.01);各用药组较MX组小鼠蜕膜组织HIF-1α、PKM2mRNA的表达明显升高(P＜0.01);与H组对比，M组蜕膜组织HIF-1α、PKM2mRNA的表达下降，有统计学意义(P＜0.05)，L组蜕膜组织HIF-1α、PKM2mRNA的表达明显下降(P＜0.01)，XY组的蜕膜组织HIF-1α、PKM2mRNA的表达未见明显差异(P＞0.05)。 结论： 4.1RSA小鼠蜕膜组织发生变异，蜕膜细胞数量明显减少，顺序杂乱，大小不一，细胞核减小，染色较深，细胞质水肿较明显。 4.2补肾安胎冲剂可降低RSA小鼠胚胎丢失率，明显改善RSA小鼠蜕膜组织形态，用药后小鼠蜕膜细胞数量增多，脱膜细胞增加，胞浆水肿缓解，胞质逐渐丰富。 4.3补肾安胎冲剂可能通过调节有氧糖酵解促进RSA小鼠子宫内膜蜕膜化。
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