摘要
杜仲自古以来就是我国药食同源的植物，近年来植物多糖的生理活性越来越受到关注，为了开发新型药食同源抗氧化功能性多糖，本文从杜仲叶中提取杜仲多糖，优化杜仲多糖的提取工艺、探究杜仲多糖理化性质及体内外抗氧化能力，以挖掘杜仲多糖的潜在价值。 1.杜仲多糖提取工艺优化 通过比较不同方法下杜仲多糖的提取率，选择超声辅助热浸提法作为杜仲多糖提取方法进行后续工艺优化，以提取温度、提取时间和液固比为变量，对杜仲多糖的提取进行单因素分析和Box-Behnken响应面试验设计。结果表明:（1）超声辅助热浸提法和酶解法提取的杜仲多糖含量相对较多，分别为1.97％和1.88％,显著高于热水浸提法（P＜0.05），但两种方法杜仲多糖提取率未见显著差异。（2）优化杜仲多糖提取工艺最佳参数液固比为22∶1 mL/g,提取温度为63℃,提取时间为1 h，在此条件下杜仲多糖提取率可达2.60％。 2.杜仲多糖的理化性质分析 通过测定杜仲多糖的单糖组成、粒径大小、分子量及其他理化性质，研究其理化性质:（1）杜仲多糖中糖醛酸含量为13.8％,主要是由半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、甘露糖、葡萄糖醛酸、木糖、核糖和岩藻糖组成的一种杂多糖。（2）杜仲多糖的粒径为140.18±9.75 nm,粒子大小较为均一。（3）杜仲多糖的分子量为101.324 kDa。（4）杜仲多糖中不含单糖物质、酚羟基，不含蛋白质，是一种非淀粉类多糖。 3.杜仲多糖体外抗氧化能力测定 通过对杜仲多糖的ABTS+自由基清除能力、DPPH自由基的清除能力、羟自由基清除能力及总还原力进行测定，得到结论:（1）当杜仲多糖浓度为0.5 mg/mL时，ABTS+自由基清除率达到101.17％，其IC50为0.254 mg/mL。（2）当杜仲多糖浓度为1 mg/mL时，DPPH自由基清除率达到87.05％,其IC50为0.210 mg/mL。（3）当杜仲多糖浓度为30 mg/mL时，·OH自由基清除率达到65.92％,其IC50为24.832 mg/mL。（4）当杜仲多糖浓度为1 mg/mL时，其还原力为1.044。由此可知，杜仲多糖有较强的体外抗氧化能力，且抗氧化能力随浓度增加而增强。 4.杜仲多糖体对氧化应激的缓解作用 选取30只4周龄昆明小鼠（20.95±1.71 g）建立小鼠氧化应激模型。将小鼠随机分成共5组，每组6只，设置空白组（C组）、敌草快组（D组）、低剂量杜仲多糖组（L组）、中剂量杜仲多糖组（M组）及高剂量杜仲多糖组（H组）。L、M和H组小鼠分别每日灌胃100 mg/kg、200 mg/kg及400 mg/kg的杜仲多糖溶液，C组及D组小鼠每日灌胃同等体积生理盐水，连续灌胃14 d。最后一次灌胃12h后，L、M、H和D组小鼠腹腔注射25 mg/kg的敌草快。测定血清中抗氧化指标、肝脏和肾脏相关基因表达量及分析小鼠肠道微生态变化情况。结果表明:（1）与D组相比，杜仲多糖组（L、M和H组）显著增加了小鼠血清中SOD、CAT、GSH-Px和T-AOC水平，降低MDA水平（P＜0.05）。（2）杜仲多糖上调肝脏和肾脏Nrf2、HO-1、NQO1基因表达量，下调肝脏和肾脏的Keap1的基因表达量。（4）杜仲多糖能够升高肠道内厚壁菌门/拟杆菌门的比值，从而调节肠道菌群比例。
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