摘要
目的:探究凉血通瘀方“从肠治脑”途径调节急性期脑出血(AICH)大鼠神经-内分泌-免疫(NEI)网络的功能，从而减轻脑损伤，发挥神经保护作用的可能机制。 方法:选取90只健康雄性SD大鼠，通过改良自体尾动脉血注射法建立AICH大鼠模型，分空白组、假手术组、模型组、凉血通瘀组及益生菌组，每组18只。凉血通瘀组和益生菌组大鼠每日分别予凉血通瘀方煎剂、益生菌溶液灌胃，模型组以等体积的0.9％NaCl灌胃，给药周期为3d。治疗前后对AICH大鼠进行神经行为学检查，干湿重法测定各组大鼠脑含水量，HE染色观察脑组织病理改变及血肿形态以评估脑损伤程度;采集各组大鼠十二指肠段迷走神经(VN)放电信号波形，高效液相色谱荧光法(HPLC-FLD)检测脑组织中去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)水平以分析凉血通瘀方对VN和单胺神经递质的影响;蛋白质印迹(WB)法检测各组大鼠结肠组织中粘蛋白2(MUC2)、分泌型免疫球蛋白A(SIgA)和G蛋白偶联受体43(GPR43)表达，酶联免疫吸附法(ELISA)测定结肠中抗菌肽溶菌酶(LYS)和β-防御素(β-DF)含量，流式细胞术(FCM)检测外周血中辅助性T细胞17(Th17)和调节性T细胞(Treg)比率，研究对肠道内分泌-免疫的调节作用。 结果:1.对AICH大鼠脑损伤的影响:(1)行为学:模型组、凉血通瘀组和益生菌组造模成功后的即刻行为学评分之间无统计学差异;灌胃3d后，凉血通瘀组和益生菌组评分均比治疗前不同程度降低(p＜0.01,p＜0.05)，凉血通瘀组评分显著低于模型组(p＜0.01)。(2)脑组织含水量、病理改变及血肿形态:与空白组和假手术组相比，模型组、凉血通瘀组及益生菌组脑含水量均显著升高(p＜0.01)，凉血通瘀组均不同程度低于模型组和益生菌组(p＜0.01，p＜0.05);凉血通瘀组大鼠脑组织镜下的血肿区域较模型组单一，血肿吸收情况、周围组织完整程度均明显优于模型组和益生菌组。 2.对VN和神经递质的影响:(1)VN传导:与空白组和假手术组大鼠相比，模型组VN放电速率显著加快、振幅显著降低(p＜0.01)，凉血通瘀组和益生菌组VN传导与模型组相比，均显著性速率减慢、振幅升高(p＜0.01)，恢复正常传导节律。(2)脑组织神经递质:与空白组和假手术组相比，模型组和益生菌组大鼠NE、DA含量均显著降低(p＜0.01)，凉血通瘀组NE和DA含量显著高于模型组和益生菌组(p＜0.01)。 3.对肠道内分泌-免疫功能的影响:(1)MUC2表达和抗菌肽(LYS、β-DF)含量:与空白组和假手术组相比，模型组、凉血通瘀组和益生菌组结肠中MUC2蛋白表达量均下调(p＜0.05),凉血通瘀组与模型组、益生菌组相比上调(p＜0.05)，益生菌组和模型组之间无差异;与空白组和假手术组相比，模型组结肠中LYS、β-DF含量均显著降低(p＜0.01)，凉血通瘀组含量显著升高(p＜0.01)，且凉血通瘀组显著高于益生菌组(p＜0.01)，益生菌组与模型组相比，LYS含量升高(p＜0.05)，β-DF含量无差异。(2)SIgA、GPR43表达和Th17/Treg细胞比率:与空白组和假手术组相比，模型组SIgA、GPR43表达量均下调(p＜0.05)，凉血通瘀组较模型组表达量上调(p＜0.05)，益生菌组和模型组之间无差异;与空白组和假手术组相比，模型组、凉血通瘀组和益生菌组外周血Th17/Treg细胞比率均显著升高(p＜0.01)，凉血通瘀组和益生菌组较模型组均显著降低(p＜0.01)，益生菌组高于凉血通瘀组(p＜0.05)。 结论:凉血通瘀方有效减轻AICH大鼠脑损伤程度，其机制可能是通过恢复十二指肠段VN传导节律和脑内单胺神经递质水平，并改善肠道内分泌-免疫功能，得以调节机体NEI网络，加强肠-脑轴(GBA)之间联系，从而发挥“从肠治脑”的神经保护作用。
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