摘要
目的 观察电针对心肌梗死小鼠心功能及心脏组织中交感神经重构及巨噬细胞极化的影响，探讨电针促进心肌损伤保护的可能机制。 方法 1.将雄性SPF级C57BL/6J小鼠随机分为假手术(SHAM)组、模型(MI)组和电针(EA)组。模型组、电针组通过结扎心脏冠状动脉左前降支建立心肌缺血模型。电针组于造模成功后，电针小鼠双侧“内关”穴治疗:2/15Hz,疏密波，1mA,20min/次，每周3次共治疗4周。运用超声心动图评价小鼠心脏射血分数(EF)及短轴收缩率(FS),天狼星红染色观察小鼠心脏纤维化情况，ELISA检测小鼠血清中BNP水平以及心肌组织与血清中NE水平，肢体Ⅱ导联心电图检测小鼠心率变异性(HRV),免疫组化与免疫荧光检测各组小鼠心肌组织中TH、GAP43表达，流式细胞术检测各组小鼠心肌组织中中性粒细胞、巨噬细胞数量以及各表型巨噬细胞占比。 2.将雄性SPF级C57BL/6J小鼠随机分为MI后1天组、MI后3天组、MI后7天组。每一大组再分别随机分为假手术组、模型组和电针组。模型组、电针组建立心肌缺血模型。电针组于造模成功后，电针小鼠双侧“内关”穴治疗:2/15Hz,疏密波，1mA，20min/次。1天组中电针组小鼠，每天电针一次，共1次;3天组中电针组小鼠，每天电针一次，共3次;7天组中电针组小鼠，每天电针一次，共7次。运用流式细胞术检测不同时间点各组小鼠心肌组织中中性粒细胞、巨噬细胞数量以及各表型巨噬细胞占比，PCR法检测7天各组小鼠心肌组织中TNF-α、IL-1β、TH、GAP43的mRNA表达量，Westernblot法检测7天各组小鼠心肌组织中IL-1β、IL-17A、TH、NGF的蛋白表达水平，免疫荧光检测7天各组小鼠心肌组织中F4/80、NGF的表达。 结果 1.电针促心肌梗死小鼠心脏保护效应及对心率变异性的影响 (1)心功能变化:与假手术组相比，模型组与电针组小鼠EF、FS值均显著下降(P＜0.0001);通过2次电针治疗，在第3天时，电针组小鼠心脏EF值较模型组有所回升(P＜0.01)，但FS值变化无统计学意义(P＞0.05);造模7天后的实验数据表明，一周的电针治疗明显提升了小鼠心脏EF、FS值(P＜0.001,P＜0.01);造模14天后，电针组小鼠EF、FS值持续升高，较模型组小鼠差异存在统计学意义(P＜0.001);造模21及28天后，从统计图来看，电针组小鼠心脏EF、FS值变化趋于平缓，但与模型组相比显著升高(P＜0.0001,P＜0.001)。与电针组不同的是，模型组小鼠心脏EF、FS值在多个时间点始终远远低于假手术组(P＜0.0001)。 (2)心肌纤维化与损伤标志物变化:与假手术组相比，模型组小鼠胶原容积分数(CVF)明显升高(P＜0.0001),血清中BNP水平差异无统计学意义(P＞0.05);经过电针干预后，电针组小鼠胶原容积分数显著降低(P＜0.0001),BNP水平下降(P＜0.05)。 (3)心率变异性与交感神经递质变化:与假手术组相比，模型组小鼠LF值与LF/HF均显著升高(P＜0.0001)，HF值明显下降(P＜0.0001)，心肌组织与血清中的NE水平均明显上升(P＜0.05);而电针组小鼠LF值与LF/HF较模型组明显下降(P＜0.0001)，相对的HF值也随之升高(P＜0.0001),心肌组织以及血清中的NE水平降低(P＜0.05)。 2.电针对心肌梗死小鼠心脏组织中交感神经相关物质及巨噬细胞极化的影响 (1)MI后28天心脏交感神经重塑变化:在400倍视野下，与假手术组相比，模型组小鼠TH阳性面积占比与GAP43阳性细胞密度均明显升高(P＜0.01，P＜0.05);而电针组小鼠TH阳性面积占比与GAP43阳性细胞密度较模型组有所回落(P＜0.05)。从免疫荧光图片中也可看出，在模型组中TH与GAP43阳性共表达较假手术组有所增多，而通过电针治疗后与模型组相比，TH与GAP43阳性共表达相对减少。 (2)MI后28d心肌组织中中性粒细胞、巨噬细胞数量以及各表型巨噬细胞占比变化:尽管已经不处于急性炎症期,模型组小鼠心肌组织中巨噬细胞数量相比假手术组仍处于升高状态(P＜0.05),但心肌组织中M1、M2巨噬细胞占比以及中性粒细胞数量与假手术组相比无明显差异(P＞0.05);而经过电针治疗后的小鼠心肌组织中巨噬细胞数量较模型组降低(P＜0.05)。 (3)MI后1d、3d、7d心肌组织中中性粒细胞、巨噬细胞数量以及各表型巨噬细胞占比变化:MI1天后，模型组小鼠心肌组织中中性粒细胞、巨噬细胞数量、M1型巨噬细胞占比与假手术组比较，均显著上升(P＜0.01,P＜0.01,P＜0.001),M2型巨噬细胞占比也随之降低(P＜0.001);但电针组各项指标与模型组相比并无差异(P＞0.05)。MI3天后，模型组小鼠心肌组织中中性粒细胞、巨噬细胞数量与假手术组相比明显增多(P＜0.0001);电针组小鼠与模型组比较，心肌组织中中性粒细胞数量、M1型巨噬细胞占比均明显下降(P＜0.0001,P＜0.01),M2型巨噬细胞占比明显升高(P＜0.01),但巨噬细胞数量与模型组之间不存在差异(P＞0.05)。MI7天后，与假手术组相比，模型组小鼠心脏组织中中性粒细胞、巨噬细胞数量、M1型巨噬细胞占比明显上升(P＜0.0001,P＜0.001,P＜0.05)，同时M2型巨噬细胞占比下降(P＜0.05);与模型组相比，电针组小鼠心肌组织中的中性粒细胞数量以及巨噬细胞数量、M1型巨噬细胞占比明显下降(P＜0.0001,P＜0.001,P＜0.05),M2型巨噬细胞占比升高(P＜0.05)。 (4)MI后7天心肌组织中各炎症因子变化:与假手术组相比，心肌组织中TNF-α、IL-1β的mRNA表达量上升(P＜0.01,P＜0.001),IL-1β、IL-17A蛋白表达水平上升(P＜0.05,P＜0.01);与模型组相比，心肌组织中TNF-α、IL-1β的mRNA表达量下降(P＜0.001，P＜0.001),IL-1β、IL-17A蛋白表达水平降低(P＜0.05，P＜0.001)。 (5)MI后7天心脏交感神经重塑与巨噬细胞表达变化:与假手术组相比，模型组小鼠心肌组织中TH、GAP43的mRNA表达量明显上升(P＜0.01),心肌组织中TH、NGF的蛋白表达水平上升(P＜0.05);与模型组相比，电针组心肌组织中TH、GAP43的mRNA表达量降低(P＜0.05)，心肌组织中TH、NGF的蛋白表达水平降低(P＜0.05)。从免疫荧光图片中得出，F4/80与NGF之间存在共表达，且在模型组中小鼠心脏组织F4/80与NGF阳性共表达较假手术组有所增多(P＜0.01)，而通过电针治疗后，F4/80与NGF阳性共表达减少(P＜0.05)。 结论 1.电针可能通过减轻MI后的心肌纤维化，改善心室不良重塑，预防心力衰竭的发生，实现心肌保护效应。 2.电针可能通过抑制MI后心脏交感神经重塑，降低心脏交感神经活性，调节自主神经平衡，实现心肌保护效应。 3.电针可能通过减少心肌组织中中性粒细胞，促进巨噬细胞向M2型极化，加快炎症反应进程，调控交感神经重塑，调节自主神经平衡，预防心力衰竭的发生，实现心肌保护效应。
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