摘要
中华绒螯蟹（EriocheirSinensis)是一种重要的淡水经济养殖物种，在2022年产量达到80.8万吨，但是不合理的饲料投喂和养殖管理会引起水体中氨氮含量过高，对中华绒螯蟹造成毒害。非离子氨很容易通过细胞膜进入中华绒螯蟹体内，破坏肝胰腺组织的结构，引起血淋巴和肝胰腺氧化应激，造成中华绒螯蟹抗氧化和非特异性免疫能力下降。此外，氨暴露导致肠道微生物群的失调，降低肠道菌群的丰富性和多样性。作为天然抗氧化剂，褪黑素（melatonine）的抗氧化功效已经被广泛研究，褪黑素是一种直接的自由基清除剂，具有中和活性氧的能力，调节抗氧化酶，从而影响动物的抗氧化防御水平。本试验以中华绒螯蟹（25±5g）为研究对象，在基础饲料中添加500mg/Kg褪黑素，标记为MT组和Nor组，投喂饲养2周。养殖试验结束后，对其测定血淋巴和肝胰腺的抗氧化指标，非特异性免疫指标（ACP,AKP和LZM）。最后用20.43mg/LNH4Cl浓度对中华绒螯蟹进行48h急性氨氮攻毒试验，标记为M_NH4N组，MT_C组，N_NH4N组，Nor_C组，结束后对其测定血淋巴和肝胰腺的抗氧化能力、非特异性免疫能力以及肠道菌群。结果如下: 1.褪黑素投喂可以显著提高中华绒螯蟹血淋巴总抗氧化能力（T-AOC），过氧化氢酶（CAT），超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力（P＜0.05），降低了丙二醛（MDA）含量;显著提高了肝胰腺T-AOC和SOD活力（P＜0.05），显著降低了MDA含量和酸性磷酸酶（ACP）活性（P＜0.05）。结果表明，褪黑素投喂能增强中华绒螯蟹的血淋巴和肝胰腺的抗氧化酶活力、减轻脂质过氧化水平。褪黑素投喂增加了中华绒螯蟹肠道有益菌Dysgonomonas和Lactococcus的丰度，降低了有害菌Aeromonas和Arcobacter的丰度，以及增加了肠道菌群α多样性Chao1和Shannon指数。结果表明褪黑素可以增加肠道菌群的多样性和丰富性，有益菌属Dysgonomonas和Lactecoccus是潜在提高中华绒螯蟹免疫能力的肠道菌群。 2.中华绒螯蟹48h急性氨氮暴露结果显示，氨氮暴露显著提高中华绒螯蟹血淋巴GSH-Px,SOD,髓过氧化物酶（MPO），CAT活性以及MDA含量（P＜0.05）。氨氮暴露显著降低中华绒螯蟹肝胰腺GSH-P活力（P＜0.05），以及显著提高了肝胰腺T-AOC,SOD,谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）活力以及MDA含量（P＜0.05）。氨氮暴露下肝细胞破裂崩解，肝小管结构遭到破坏，细胞排列出现紊乱，出现严重的空泡化。氨氮暴露下肝胰腺细胞出现空泡化，破裂以及坏死，以及抗氧化能力增强和MDA含量增加，表明氨氮对中华绒螯蟹肝胰腺造成了一定损伤以及加重脂质过氧化水平。氨氮暴露显著降低中华绒螯蟹血淋巴总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）含量（P＜0.05），显著提高ACP和碱性磷酸酶（AKP）。以及显著提高中华绒螯蟹肝胰腺AKP，ACP和溶菌酶（LZM）活性（P＜0.05）。研究结果表明氨氮刺激并增加了非特异性免疫酶活，最终导致中华绒螯蟹非特异性免疫能力降低。氨氮暴露降低了中华绒螯蟹肠道有益菌Parabacteroides,Bacteroides和Dysgonomonas的丰度，增加了有害菌Aeromonas和Ralstonia的丰度，该研究结果表明氨氮会造成肠道菌群的失调。肠道菌群α多样性Shannon指数降低，说明降低了肠道菌群的丰富性和多样性，以及肠道有益菌群丰度的降低和有害菌群丰度的升高，可能会导致中华绒螯蟹疾病的发生。 3.褪黑素预处理后暴露于氨氮中，结果显示褪黑素预处理显著提高了中华绒螯蟹血淋巴T-AOC,GSH-Px,SOD,MPO和CAT活力（P＜0.05）,以及显著降低MDA，TP和ALB含量（P＜0.05）。研究结果表明褪黑素预处理可以缓解氨氮暴露对于中华绒螯蟹的毒害，通过提高血淋巴抗氧化能力，减弱脂质过氧化的途径。褪黑素预处理显著降低中华绒螯蟹肝胰腺T-AOC,SOD,LZM活力和MDA含量（P＜0.05），显著提高GSH-Px活性（P＜0.05），此外HE染色切片结果显示褪黑素预处理可以缓解氨氮对于肝胰腺细胞的伤害，表明褪黑素一定程度上缓解氨氮对于中华绒螯蟹肝胰腺的损伤。褪黑素预处理后降低了有益菌Lactococcus,Dysgonomonas，Candidatus_Hepatoplasma的丰度，增加了有益菌Parabacteroides,Bacteroides,Shewanella的丰度，降低了有害菌Aeromonas和Ralstonia的丰度，以及肠道菌群α多样性Shannon指数增加。研究结果表明褪黑素预处理通过改变肠道有益菌群的丰度，减少有害菌群的丰度，减弱了氨氮对肠道菌群的破坏。
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