摘要
目的:观察肠康方对腹泻型肠易激综合征（IBS-D）模型大鼠的影响，基于“微生物-肠-脑”轴（MGBA）从肠道菌群影响脑肠轴中神经递质相关信号通路，及免疫调节方向探讨其作用机制，传承并挖掘名老中医验方。 第一部分:肠康方对IBS-D模型大鼠的影响。将40只Wistar大鼠随机分为正常组（Con组）、模型组（IBS组）、肠康方治疗组（CKF组）和痛泻宁治疗组（TXN组）。除正常对照组外，其余各组大鼠均采用束缚刺激+番泻叶灌胃造模。14天造模后，再分别灌胃给药14天，监测大鼠体重、粪便Bristol评分及含水率改变，根据AWR评分评估大鼠内脏敏感性;HE染色观察大鼠结肠组织病理学变;ELISA检测大鼠血清中相关炎症因子及LPS水平;免疫组化观察ZO-1（结肠）、C-FOS（结肠和脑海马区）、SERT（脑海马区）和5-HT（结肠和脑海马区）表达水平;免疫荧光法检测结肠组织中SERT的表达情况;Westernblot法检测结肠组织中SATA3/p-STAT3/SERT信号通路相关蛋白的表达水平;高通量测序技术检测大鼠肠道菌群。实验结果表明:（1）肠康方可以降低IBS-D模型大鼠粪便Bristol评分、粪便含水率和AWR评分;（2）肠康方可以降低促炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的水平，增加抗炎因子IL-10的水平，同时提高结肠ZO-1表达降低血清LPS水平，达到抑制炎症反应并增强肠黏膜屏障的作用;（3）肠康方可以提高结肠组织和脑海马区SERT表达，降低5-HT表达，同时结肠组织中伴随p-STAT3水平降低:（4）肠康方可以降低结肠组织和脑海马区C-FOS的表达;（5）肠康方可以增加肠道菌群多样性指数（Shannon、Simpson）,降低F/B比值，显著增加有益菌Muribaculaceae的丰度和减少有害菌Escherichia-Shigella的丰度。 第二部分:肠康方对伪无菌IBS-D模型大鼠的影响。予大鼠自由饮用含四种抗生素的无菌水Abx（氨苄西林lg/L、硫酸新霉素Ig/L、甲硝唑lg/L、万古霉素500mg/L）建立伪无菌大鼠模型，观察肠康方治疗对伪无菌IBS-D模型大鼠体重、粪便Bristol评分、粪便含水率、AWR评分，结肠SERT和5-HT表达的影响。实验结果表明:（1）肠康方不能改善菌群缺失的IBS-D模型大鼠粪便Bristol评分、粪便含水率、AWR评分;（2）肠康方治疗上调IBS-D模型大鼠结肠SERT表达会被抗生素干预部分阻断。 第三部分:粪菌移植（FMT）对IBS-D模型大鼠的影响。提前收集上述IBS组和CKF组大鼠粪便分别混合匀浆取上清液，以每只2ml/d灌胃IBS-D模型大鼠，连续2周，观察粪菌移植对IBS-D模型大鼠体重、粪便Bristol评分、粪便含水率、AWR评分以及结肠SERT和5-HT表达的影响。实验结果表明:（1）FMT可以降低IBS-D模型大鼠粪便Bristol评分、粪便含水率、AWR评分;（2）FMT增加了IBS-D模型大鼠结肠SERT水平，减少了5-HT水平。 结论:（1）肠康方可以改善IBS-D模型大鼠的腹痛、腹泻症状以及内脏高敏感，对IBS-D具有一定的治疗作用。（2）肠康方可以调节细胞因子从而调节免疫并增强肠道屏障，肠道屏障作为“微生物-肠-脑”轴中天然动态信号屏障是肠脑互动的基础。（3）肠康方可以调节C-FOS（神经元激活的既定标志物）的表达。（4）肠康方可以增加肠道菌群多样性指数，诱导肠道微生物群的结构变化，降低厚壁菌门/拟杆菌门比值，显著增加关键有益菌muribaculaceae的比例，减少Escherichia-Shigella等有害菌的比例。（5）通过伪无菌动物模型和FMT实验进一步证明肠康方是通过肠道菌群调节SERT/5-HT相关通路表达，影响“微生物-肠-脑”轴，达到治疗IBS-D模型大鼠的作用。总之，肠康方通过调控“微生物-肠-脑轴”发挥其多靶点的治疗优势。
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