摘要
目的: 1.评估TSHRA亚基重组腺病毒基因免疫和TSHR联合IFN-γ修饰的原代树突状细胞（Dendriticcells,DCs）免疫两种方法构建的甲状腺相关眼病（Thyriod-associatedophthalmonpath,TAO）动物模型，以优选出更接近人类TAO眼病病理的动物模型。 2.观察平目汤对TAO模型小鼠球后脂肪的影响，进一步探讨平目汤治疗的机制。 方法: 1.分别采用表达TSHRA亚基重组腺病毒基因免疫和TSHR联合IFN-γ修饰的原代DCs免疫BALB/c雌性小鼠两种方式构建TAO动物模型。实验结束后，观察各组小鼠的眼球及眼睑变化，MRI扫描评估眼球突出情况，ELISA检测小鼠血清甲状腺素和TRAb水平，病理染色观察甲状腺及球后组织的病理改变。 2.选用上述优选方法构建TAO小鼠模型，采用不同剂量的平目汤进行干预。ELISA检测血清甲状腺素和TRAb的水平，HE及改良油红O染色检测眼球后脂肪组织的体积。 结果: 1.采用TSHRA亚基重组腺病毒基因免疫BALB/c雌性小鼠构建TAO动物模型，结果显示:腺病毒组小鼠眼球明显突出。与空白组相比，腺病毒组小鼠突眼度差异具有统计学意义（P＜0.01）。与空白组和空腺病毒组相比，腺病毒组小鼠FT4及TRAb血清含量明显升高，TSH血清含量明显下降（P＜0.01）;甲状腺滤泡呈圆形、椭圆形或不规则形，滤泡上皮细胞增生，可见滤泡上皮细胞呈乳头状向腔内突起，有堆叠游离生长现象，偶可见少量淋巴细胞浸润;眼眶脂肪组织增生明显，眼球后有大量的脂肪组织堆积，有少量淋巴细胞分布;眼外肌纤维化，可见眼外肌排列紊乱、断裂;眼球后脂肪间隙透明质酸产生增加。 2.采用TSHR联合IFN-γ修饰的原代DCs免疫BALB/c雌性小鼠构建TAO动物模型，结果显示:TSHR+IFN-γ组小鼠眼球明显突出，结膜充血。与空白组相比，TSHR+IFN-γ组小鼠突眼度差异具有统计学意义（P＜0.01）。与空白组比较，TSHR组FT4血清含量明显升高，TSH血清含量明显下降（P＜0.05或P＜0.01），TSHR+IFN-γ组FT4、TRAb血清含量明显升高，TSH血清含量明显降低（P＜0.05或P＜0.01）;与IFN-γ组比较，TSHR组的FT4血清含量明显升高，TSH血清含量明显下降（P＜0.05）;与TSHR组相比较，TSHR+IFN-γ组的TRAb血清含量明显升高（P＜0.05）,余均无统计学意义（P＞0.05）。与空白组及IFN-γ组比较，TSHR组及TSHR+IFN-γ组小鼠正常甲状腺滤泡遭到破坏，甲状腺滤泡上皮细胞增生，甲状腺上皮细胞呈高柱状，部分呈乳头状褶皱延伸至滤泡内。与空白组、IFN-γ组及TSHR组相比较，TSHR+IFN-γ组小鼠眼眶脂肪组织增生明显，眼球后有大量的脂肪堆积，有少量淋巴细胞分布;眼外肌纤维化，可见眼外肌排列紊乱，断裂;眼球后脂肪间隙透明质酸产生增多。 3.经比较选择TSHRA亚基重组腺病毒免疫BALB/c雌性小鼠构建TAO模型。60只腺病毒组小鼠中，40只小鼠血清TRAb水平高于参考值上限（空白组(X)+2S），将30只小鼠使用平目汤干预，结果显示:与空白组比较，模型组，平目汤梯度剂量组FT4水平呈不同程度升高（P＜0.01），模型组，平目汤梯度剂量组血清TSH水平呈不同程度的下降（P＜0.01或P＜0.05），模型组，平目汤梯度剂量组血清TRAb水平呈不同程度的升高（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组比较，平目汤梯度剂量组FT4水平呈不同程度下降（P＜0.01或P＜0.05），平目汤中剂量组（平中组）和平目汤高剂量组（平高组）血清TSH水平上升（P＜0.01或P＜0.05），平中组和平高组血清TRAb水平下降(P＜0.01）。与平目汤低剂量组（平低组）相比较，平高组血清FT4水平下降（P＜0.05），余均无统计学意义（P＞0.05）。与空白组相比，模型组与平目汤梯度剂量组球后脂肪体积均不同程度增多（P＜0.05或P＜0.01）;与模型组相比，平中组和平高组球后脂肪体积减少（P＜0.01）;与平低组相比，平高组球后脂肪体积减少（P＜0.05）,余均无统计学意义（P＞0.05）。 结论: 1.TSHRA亚基重组腺病毒基因免疫和TSHR联合IFN-γ修饰的原代DCs免疫两种方式构建的TAO模型与人类TAO病理相似，相比较于细胞免疫，基因免疫成模率更高。 2.平目汤可以降低TAO小鼠血清FT4水平，中剂量及高剂量组可升高血清TSH水平及降低血清TRAb水平;平目汤可减少眼球后脂肪组织的堆积。
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