摘要
目的:糖尿病肾病(Diabeticnephropathy,DN)是糖尿病的主要并发症之一，是终末期肾病的主要风险因素，然而由于发病机制复杂，目前尚无针对性治疗方案。新型雷公藤制剂(5R)-5-羟基雷公藤内酯醇(雷藤舒，LLDT8)在减少致病性细胞因子表达和免疫细胞浸润以改善肾脏炎症方面的作用已在一些研究中得到证实。但LLDT8是否对DN有防治作用尚不明确。本研究旨在探讨LLDT8对糖尿病肾病是否有保护作用，揭示其防治DN的潜在药理机制，为LLDT8临床应用提供一定理论基础和数据支撑，同时为后期DN药物研发提供新的研究思路。 方法:本研究采用STZ诱导1型糖尿病，构建小鼠DN模型，以不同剂量的LLDT8进行干预。采用自动生化分析仪检测LLDT8对DN小鼠肝肾功能、肌酐水平、尿微量蛋白的影响;采用病理染色及透射电镜观察LLDT8对DN小鼠肾组织结构保护作用;通过网络药理学分析结合mRNA测序，预测LLDT8对DN可能的药理机制。通过细胞实验，利用RT-PCR、WB技术检测LLDT8对高糖诱导的TCMK1细胞趋化因子的表达和上皮间充质转变的影响;检测LLDT8对高糖诱导的RAW264.7细胞促炎、促纤维化等关键功能分子的表达影响。 结果:动物实验中，与DN组小鼠相比，高剂量LLDT8(0.25mg/kg/2d)减少了DN小鼠24h尿白蛋白排泄，有效改善了DN小鼠的肾脏结构损伤和延缓纤维化进展。网络药理学和RNA测序结果表明，LLDT8可能通过抗炎、抗纤维化、抗氧化和调节性免疫细胞浸润途径治疗DN。免疫荧光结果显示，与DN组相比，LLDT8干预减少肾组织巨噬细胞浸润;肾组织PCR、WB结果显示，与DN组相比，LLDT8干预组肾组织中趋化因子CCL2、M-CSF1降低，胶原蛋白CollagenⅠ显著降低。细胞实验中，与GLU组相比，LLDT8处理减少了高糖诱导TCMK1细胞的趋化因子分泌和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymaltransition,EMT);LLDT8处理减少了高糖诱导RAW264.7细胞的促炎因子和促纤维化因子的分泌;在细胞共培养实验中，高糖环境下RAW264.7细胞浸润迁移数量显著增加，LLDT8可有效抑制这一过程;与TCMK1细胞单独培养组相比较，共培养组中TCMK1细胞的EMT指标呈几何式增加，LLDT8能显著抑制共培养体系中TCMK1上皮间质转化。 结论:该研究表明，LLDT8可有效延缓DN小鼠肾组织结构破坏，改善DN小鼠的尿蛋白、血肌酐等指标，且不会诱发额外的肝功能损害;LLDT8能有效抑制DN小鼠肾固有细胞分泌趋化因子，减少巨噬细胞浸润;LLDT8能有效抑制巨噬细胞促炎促纤维化因子分泌，从而阻断巨噬细胞与肾固有细胞之间的恶性反馈环路，降低肾组织炎症反应，减缓组织纤维化进程。
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