摘要
目的:卵巢癌（ovariancancer,OC）是致死率排名首位的妇科恶性肿瘤，多数患者发现时已为晚期，预后不佳。外科手术联合铂类化疗是0C常用治疗方案。化疗药物通过促进癌细胞凋亡等途径起到抗癌作用，但肿瘤细胞可通过多种方式逃避细胞凋亡，从而影响化疗药物的疗效。因此，急需探寻致死肿瘤细胞的其他方式。焦亡属于一种新发现的程序性细胞死亡模式，在炎症小体的驱动下启动半胱氨酸蛋白酶（Caspases）等焦亡相关分子，造成GasderminD蛋白（GSDMD）剪切并伴随着炎症因子的释放，最终激活细胞焦亡。据报道，化疗药物可通过某些途径诱导肿瘤细胞焦亡。另外，微小RNA（microRNAs,miRNAs）在调节肿瘤对化疗药物的敏感性和耐药性等方面处于关键地位，调控miRNAs的表达可增强肿瘤对化疗的敏感性。本实验研究了顺铂对SKOV3卵巢癌细胞焦亡的影响，并进一步探讨了miR-216a-3p在其中的调节作用。 方法:倒置显微镜和扫描电镜观察顺铂作用后的SKOV3细胞形态变化，WesternBlot实验检测焦亡相关蛋白表达情况。基于高通量基因表达数据库（geneexpressionomnibus,GEO）分析OC和正常卵巢组织（ovariantissue,OT）中miRNAs的差异，并绘制出对应的热图和火山图。通过miRNAs数据集（GSE106817、GSE119056、GSE31568）、ReviewManager5.4软件来评估miR-216a-3p在0C中的表达情况。然后利用miRWALK3.0、TargetScan8.0数据库对miR-216a-3p的靶基因进行预测。随后通过实时荧光定量PCR检测miR-216a-3p在0C和OT组织中表达，免疫组织化学（Immunohistochemistry,IHC）检测焦亡标志性蛋白GSDMD在两组中的表达，并利用HPA数据库进一步验证。实时荧光定量PCR检测顺铂作用后SKOV3细胞miR-216a-3p的水平变化。通过Lipofectamine3000进行细胞转染，转染后加顺铂处理，观察转染miR-216a-3p模拟物组、抑制物组以及阴性对照组的细胞形态结构变化，利用WesternBlot技术检测焦亡相关蛋白的表达水平。 结果:顺铂促使SKOV3卵巢癌细胞发生焦亡，在48h/60uM作用下诱导焦亡较显著。通过GEO数据库分析发现miR-216a-3p在0C与OT组织中存在显著差异。与OT相比，miR-216a-3p在0C中表达升高，且与细胞焦亡密切相关。经顺铂24h/60μM处理后SKOV3卵巢癌细胞miR-216a-3p的水平降低。miR-216a-3p在顺铂诱导0C细胞焦亡中起调节作用，下调miR-216a-3p能够增强顺铂诱导的0C细胞焦亡，上调miR-216a-3p则发挥相反的功能。 结论:顺铂可引起SKOV3卵巢癌细胞焦亡，同时发现miR-216a-3p与卵巢癌细胞焦亡相关。顺铂诱导SKOV3细胞焦亡后miR-216a-3p水平下降。miR-216a-3p能够抑制顺铂诱导的卵巢癌细胞焦亡。
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