摘要
目的:原发性肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高，死亡率也位居前列，目前根治性手术仍是治疗肝癌最常用且最有效的方案，但其术后5年复发率高达70％，由于肝癌是一种侵袭性较为强烈的恶性肿瘤，非常容易发生远处转移及复发等情况。故此，控制肝癌的远处转移目前已经成为肿瘤学研究者重点攻克的方向之一。普兰林肽（pramlintide）是一种于2005年由FDA批准的用于1型、2型糖尿病的辅助治疗的药物，该药物属于内源性胰岛淀粉样多肽（isletamyloidpolypeptide,IAPP;又称为胰淀素）的非聚合异构体。目前已有相关文献报道IAPP过表达的胰腺癌细胞株出现了增殖能力下调的情况，得出了过表达IAPP或使用普兰林肽可以改善胰腺癌吉西他滨耐药株耐药情况的结论，我们以此为切入点进行研究讨论普兰林肽对肝癌的相关影响。本研究旨在明确适宜浓度普兰林肽对不同肝癌细胞株有氧糖酵解的抑制作用，探究普兰林肽抑制有氧糖酵解后对肝癌细胞系EMT、增殖、侵袭、迁移的影响，明确普兰林肽调控肝癌生物学行为的作用机制。 研究方法:通过ECAR实验，我们证明了普兰林肽对不同的肝癌细胞株的有氧糖酵解过程有重要作用影响，且普兰林肽浓度为10mg/L时对肝癌细胞EMT表型及其细胞转移、侵袭能力的抑制效果颇为显著，使用wave2.6及ImageJ进行数据分析;通过MTS及克隆形成实验明确抑制糖酵解后肝癌细胞系增殖能力的改变;通过AV-PI实验检测抑制糖酵解后肝癌细胞系凋亡情况;通过Western-Blotting及Transwell相关实验明确普兰林肽对肝癌细胞系侵袭、迁移及EMT的变化，使用ImageJ计数并进行基础数据处理及灰度值分析;通过重新激活糖酵解实验，探究肝癌细胞生物活性、糖酵解水平及生物学行为的改变。 结果:1、与对照组相比，以浓度为10mg/L的普兰林肽对不同的肝癌细胞株进行处理，ECAR实验结果表明普兰林肽对肝癌的有氧糖酵解过程有较理想的抑制作用; 2、与对照组相比，普兰林肽可以通过抑制有氧糖酵解过程进而调控肝癌细胞系的增殖及凋亡行为，且其结果具有统计学意义; 3、与对照组相比，抑制糖酵解后，肝癌细胞系的侵袭、迁移及EMT等生物学行为明显减弱，通过对结果进行分析，统计学意义较为显著; 4、通过重新激活糖酵解实验，我们发现通过加入寡霉素和抑制糖酵解12小时并不影响细胞生物活性，而加入丙酮酸联合DASA-58培养则可显著恢复其糖酵解水平。而重新激活糖酵解进行回复实验，细胞的侵袭、转移及EMT能力再次随着糖酵解水平的改变而改变，其结果均具统计学意义。 结论:本研究发现普兰林肽通过抑制肝癌细胞株有氧糖酵解后抑制肝癌生物学行为，可能为肝癌临床治疗用药提供新的方向。
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