摘要
目的: 通过随机对照临床试验，观察“乳腺熏洗方”促进非哺乳期乳腺炎（NPM）术后生肌收口期创面愈合的临床疗效和安全性;通过网络药理学研究和分子对接，预测“乳腺熏洗方”促进乳房创面愈合的关键作用靶点和通路;基于IL-6/STAT3通路对“乳腺熏洗方”促进NPM术后创面愈合的外治机制进行探索，为中药熏洗疗法的临床应用提供依据。 方法: 1.采用随机对照临床试验方法，病例收集2022年11月至2023年8月于上海中医药大学附属龙华医院中医乳腺科住院手术、术后创面处于生肌收口期的NPM患者，将98例符合病例选择标准的患者按照1∶1随机分为治疗组和对照组，进行为期12天的研究性治疗。在常规换药的基础上，治疗组给予“乳腺熏洗方”熏洗治疗，对照组给予0.9％生理盐水熏洗治疗。于治疗前后测量两组受试者创腔体积、创口面积、创腔深度，观察创面肉芽组织状态;同时对外周血血常规（WBC、NEU、NEU％、PLT）、C-反应蛋白、血沉及细胞因子水平变化进行检测，比较两组住院时间、创面愈合时间及创面愈合后局部症状，并进行安全性评估。 2.使用TCMSP数据库检索并筛选“乳腺熏洗方”主要活性成分和靶点，在GeneCards数据库中查找乳房创面愈合相关靶点，应用String-db、DAVID、Metascap等数据库及Cytoscape3.10.10软件，将“乳腺熏洗方”与乳房创面愈合的共同靶点构建PPI网络图，对重要靶点进行GO富集和KEGG功能分析，并可视化呈现。利用AutoDock软件对关键靶点与多种药物共同含有的化合物进行分子对接。 3.参与临床研究的受试者每组各选取5例，采用WesternBlot方法分别检测两组治疗前后创面组织中IL-6/STAT3信号通路相关蛋白及VEGF蛋白表达，进行治疗前后和组间比较;采用免疫组织化学法检测、分析两组治疗后创面组织IL-6、STAT3阳性率，进行组间比较。 结果: 1.临床随机对照试验部分，最终有94例受试者纳入结局指标分析，两组基线比较无统计学差异（P＞0.05）。主要研究结果显示:（1）治疗组创腔体积、创口面积缩小率均明显高于对照组(P＜0.01)，创腔平均深度缩小率两组无统计学差异(P＞0.05);(2)治疗组治疗后创面肉芽状态改善优于对照组(P＜0.01):(3)两组治疗后WBC、NEU、NEU％、PLT、C-反应蛋白、血沉均较治疗前降低(P＜0.05)，但组间比较无显著差异(P＞0.05);(4)治疗组平均住院时间、创面愈合时间均短于对照组(P＜0.05);(5)治疗组创面愈合后局部不适症状(刺痛、皮肤僵硬)发生率低于对照组(P＜0.05)。 2.网络药理学研究显示，“乳腺熏洗方”促进乳房创面愈合涉及101个靶点，关键分子(排序前20)主要分为基质金属蛋白酶(MMP2、MMP9)、细胞因子(IL-1β、IL-6、EGFR、TGF-β、TNF、FGF2)、细胞间黏附分子、抗凋亡蛋白和信号转导蛋白(STAT3、MAPK)，主要通路(前20)包括VEGF、HIF-1、IL-17、AGE-RAGE、TNF等多条创面愈合经典信号通路。分别对关键分子中的IL-6、STAT3与黄酮类(黄芪、儿茶、蒲公英)及植物甾醇类化合物(当归、郁金、泽兰、桂枝)进行分子对接，表明关键作用靶点与核心有效成分具有较好的亲和性。 3.机制探索部分，治疗后治疗组创面组织IL-6、JAK2、STAT3蛋白表达下调，但不显著(P＞0.05),对照组创面组织IL-6、JAK2、STAT3蛋白表达上调(P＜0.05);两组组间比较，治疗前后创面IL-6、STAT3蛋白表达变化均有统计学差异(P＜0.05);治疗组VEGF蛋白表达有上调趋势，但不具有统计学意义(P＞0.05);两组组间比较，治疗前后VEGF蛋白变化无显著差异(P＞0.05)。免疫组化分析结果显示，治疗后治疗组创面组织IL-6、STAT3阳性面积比、阳性细胞占比均低于对照组(P＜0.05)，IL-6阳性面密度亦低于对照组(P＜0.05)。 结论: 1.临床研究结果显示，“乳腺熏洗方”熏洗能有效促进NPM术后创面愈合，缩短愈合时间，并能改善创面愈合质量，其作用机制可能与减轻炎症反应有关。 2.网络药理学及分子对接结果显示，“乳腺熏洗方”通过多成分、多靶点、多途径的协同调节作用促进乳房创面愈合。生物信息学分析预测了“乳腺熏洗方”在乳房创面治疗中的关键靶点和可能的作用机制。 3.进一步的机制研究发现，“乳腺熏洗方”熏洗促进NPM术后创面愈合，是通过抑制IL-6/STAT3信号通路，减轻创面炎症反应发挥作用。该通路可能是NPM术后创面治疗研究的方向。
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