摘要
目的:鬼臼毒素(Podophyllotoxin,PPT)为肿瘤细胞抑制性药物，因其胃肠道毒性大、水溶性差，以及对正常细胞毒性较大等缺点，限制了药物临床应用。本研究将PPT制备为胶束冻干粉以增加药物水溶性及稳定性，将胶束包埋进温敏凝胶体系，制备纳米凝胶剂。考察其体外4T1乳腺癌细胞的毒性作用，以及体内对BALB/c小鼠4T1乳腺癌肿瘤模型的抗肿瘤作用。 方法:以胶束的包封率(EncapsulationEfficiency,EE)以及载药量(DrugLoading,DL)为考察指标，通过直接溶解法制备鬼臼毒素胶束溶液(PodophyllotoxinMicelle,PPTM);在单因素实验基础上，通过中心组合设计-响应面法对胶束处方进行优化。对鬼臼毒素胶束冻干粉(PodophyllotoxinMicellePowder-inject,PPTMP)的冻干保护剂进行筛选。对温敏凝胶的处方进行单因素筛选后，加入PPTMP制备鬼臼毒素纳米凝胶剂(PodophyllotoxinMicelleTemperature-sensitiveGel，PPTM-Gel)。采用粒径仪、电子显微镜以及扫描电镜等方法对PPTM、PPTMP、PPTM-Gel进行体外表征考察。采用透析法对PPT、PPTMP以及PPTM-Gel的体外释放规律进行考察。以CCK-8细胞毒性实验测定制剂的抗肿瘤活性。建立4T1荷瘤的BALB/c小鼠皮下乳腺癌模型，评价制剂的体内抗肿瘤活性。 结果:确定PPT的高效液相色谱检测方法，在1.0-40.0μg/mL内具有较好的线性关系，精密度等RSD均小于2.00％。制备得到以泊洛沙姆F127(PoloxamerF-127,F127)和吐温80(Tween80,T80)为载体材料，EE(％)为90.43±3.26、DL(％)为3.85±0.14、粒径为20.25±3.25nm的PPTM。优化的温敏凝胶的处方为:2.00％的聚乙烯醇(PolyvinylAdlohol,PVA)、2.00％的壳聚糖(Chitosan，CS)、5.45％的β-GP(β-SodiumGlycerophosphate,β-GP)以及5μmol/L的戊二醛(Glutaraldehyde,GA)。将PPTMP与温敏凝胶溶胶混合，制备在常温下具有流动性的、并具有三维多孔网状结构的PPTM-Gel。CCK-8细胞毒性实验结果显示，PPTMP与PPT对于4T1乳腺癌细胞具有明显的细胞生长抑制作用。4T1荷瘤BALB/c小鼠模型验证了PPTM-Gel和PPTMP对于乳腺癌有良好的抑制作用。 结论:本研究制备PPTMP，增加了PPT的水溶性，并提高其稳定性;制备了具有温敏性的纳米凝胶剂;验证PPTMP以及PPTM-Gel对于4T1荷瘤BALB/c小鼠乳腺癌模型具有明显的抗肿瘤作用。
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