摘要
目的: 通过肝癌细胞系和肝癌小鼠模型，研究鸦胆子苦醇联合索拉非尼对肝癌的作用效应，并研究其作用机制与铁死亡的联系。 方法: (1)使用不同浓度的鸦胆子苦醇刺激多种肝癌细胞系，采用CCK8检测、肝癌细胞克隆形成实验、EDU488增殖细胞染色以及流式PI周期染色的方法研究鸦胆子苦醇对多种肝癌细胞增殖的影响。(2)建立Hepa1-6皮下瘤肝癌小鼠模型以及Hepa1-6原位肝癌小鼠模型，验证鸦胆子苦醇对两种肝癌模型小鼠的影响。(3)流式7-AAD/PEAnnexinⅤ染色用于检测鸦胆子苦醇诱导肝癌细胞死亡的作用，通过对肝癌细胞活性氧检测、线粒体活性氧检测、脂质过氧化传感器(Bodipy581/591C11)以及丙二醛(MDA)检测研究鸦胆子苦醇诱导的肝癌细胞死亡与铁死亡的联系。(4)采用热漂移实验方法分析鸦胆子苦醇作用于肝癌细胞的靶点。(5)基于TCGA肿瘤数据库分析Nrf2与索拉非尼疗效的相关性以及Nrf2与肝癌铁死亡的相关性，通过检测药物联合指数研究鸦胆子苦醇联合索拉非尼抗肝癌的作用。 结果: (1)CCK8结果表明，与对照组相比，鸦胆子苦醇可以降低Hepa1-6、SK-Hep-1、HepG2、Hep3B、PLC/PRF/5、Huh7肝癌细胞系OD450(p＜0.05);克隆形成实验结果表明，与对照组相比，鸦胆子苦醇干预后，多种肝癌细胞系的细胞增殖面积减少(p＜0.05);EDU-488实验结果表明，与对照组相比，鸦胆子苦醇给药组EDU阳性细胞数目显著减少(p＜0.05);流式细胞周期检测结果显示，与对照组相比，鸦胆子苦醇处理组G2/M期肝癌细胞比例显著增加(p＜0.05)。(2)Hepa1-6皮下瘤肝癌小鼠模型结果表明，与对照组相比鸦胆子苦醇给药组小鼠肿瘤大小显著降低(p＜0.05);Hepa1-6原位肝癌小鼠模型结果表明，与对照组相比，鸦胆子苦醇给药组小鼠肿瘤大小显著降低(p＜0.05)。(3)流式7-AAD/PEAnnexinⅤ染色结果表明，与对照组相比，鸦胆子苦醇给药组肝癌细胞活细胞群比例降低(p＜0.05);活性氧检测结果表明，与对照组相比，鸦胆子苦醇给药组肝癌细胞活性氧水平上升(p＜0.05);线粒体超氧化物检测结果表明，与对照组相比，鸦胆子苦醇给药组肝癌细胞线粒体超氧化物表达增加(p＜0.05);流式检测Bodipy581/591C11结果表明，与对照组相比，鸦胆子苦醇给药组Bodipy581/591C11阳性细胞比例上升(p＜0.05);MDA检测结果表明，与对照组相比，鸦胆子苦醇给药组肝癌细胞MDA水平上升(p＜0.05)。(4)热漂移实验结果表明，鸦胆子给药组Nrf2蛋白表达上调。(5)TCGA肿瘤数据库分析结果表明，索拉非尼用药患者与其他用药患者Nrf2基因表达具有差异(p＜0.05);药物联合指数检测结果表明，鸦胆子苦醇联合索拉非尼对肝癌细胞的药物联合指数评分大于10。 结论: (1)鸦胆子苦醇降低肝癌细胞的活力，抑制肝癌细胞的增殖，将肝癌细胞的周期阻滞在G2/M期。(2)鸦胆子苦醇在Hepa1-6皮下瘤肝癌小鼠模型与Hepa1-6原位肝癌小鼠模型中均具有抑制肿瘤发展的作用。(3)鸦胆子苦醇具有诱导肝癌细胞活性氧积累，促进肝癌细胞脂质过氧化，诱导肝癌细胞铁死亡的作用。(4)Nrf2是鸦胆子苦醇对肝癌细胞的作用靶点。(5)Nrf2与索拉非尼诱导的铁死亡存在联系，鸦胆子苦醇具有协同索拉非尼诱导肝癌细胞铁死亡的作用。
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