摘要
目的: 本研究基于网络药理学，以TRPV1为目标靶点，利用分子对接及实验验证TRPV1在慢性瘙痒中的作用，并进一步验证芩珠凉血方外用是否可以有效抑制慢性瘙痒以及芩珠凉血方是否通过TRPV1发挥止痒疗效。 方法: 1.本研究基于网络药理学筛选出芩珠凉血方的潜在成分及其缓解瘙痒的可能作用靶点，并根据结果筛选出TRPV1靶点。 2.利用分子对接进一步对TRPV1与芩珠凉血方的结合活性进行预测，并通过免疫荧光实验检测TRPV1的消融效率，通过构建慢性瘙痒模型验证TRPV1在慢性瘙痒中的作用。 3.为了验证芩珠凉血方外用是否可以有效抑制慢性瘙痒，制作了三个浓度的外用乳膏，并通过动物实验验证其止痒疗效;进一步利用免疫荧光实验、RT-qPCR检测神经纤维、免疫细胞、免疫因子等的表达情况;利用钙离子成像技术探究芩珠凉血方对TRPV1阳性神经元活性的影响，探究芩珠凉血方缓解慢性瘙痒的作用机制。 结果: 1.通过网络药理学筛选出1189个成分，去除重复成分后，共获得1077个成分，筛选出1313个靶点;根据度值、介数中心性、接近中心性都大于等于平均值，筛选出核心成分172个，核心靶点116个。基于数据库筛选出1267个瘙痒的潜在靶点，与芩珠凉血方的潜在靶点共有342个重叠靶点，其中57个核心靶点，利用蛋白网络互作筛选出排名前30的节点。 2.根据网络药理学结果筛选出TRPV1靶点，将其与芩珠凉血方中的成分进行分子对接，结果显示均具有较强的结合活性;使用RTX消融TRPV1阳性神经元，显示DRG中的TRPV1阳性神经元显著减少，皮肤中的CGRP阳性神经纤维显著减少，脊髓中的CGRP显著减少，证明TRPV1的体内消融成功;将TRPV1消融成功的小鼠构建慢性瘙痒模型，发现慢性瘙痒显著减少，皮肤状况也有所缓解，故说明TRPV1在慢性瘙痒中发挥着重要作用。 3.制作高中低三个浓度的芩珠凉血方乳膏，实验证明高浓度具有较好的止痒效果;通过进一步的实验发现使用芩珠凉血方后皮肤中的神经纤维、免疫细胞、细胞因子都有减少，并且通过钙成像实验发现芩珠凉血方可以抑制TRPV1阳性神经元的活性。 结论: 1.芩珠凉血方外用可以有效抑制慢性瘙痒。 2.芩珠凉血方可通过抑制TRPV1阳性神经元的活性来发挥止痒疗效。
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