摘要
嵌合抗原受体（CAR）修饰的免疫细胞疗法已成为一种极具前景的肿瘤治疗策略。其中，CAR修饰的T细胞疗法已有8款产品上市，在血液瘤治疗中取得了优异的效果。此外，CAR也被用于修饰其他免疫细胞，如NK细胞或巨噬细胞（MΦ）。CAR分子是由胞外抗原结合域、跨膜域和胞内信号转导域组成的合成受体，可特异性结合靶抗原并传递激活信号给免疫细胞。该疗法的关键步骤—将 CAR 分子修饰至免疫细胞，目前主要通过病毒载体转导完成，存在基因随机整合导致的突变风险，且制备过程冗长复杂，阻碍了CAR细胞疗法的推广。因此，开发一种更具安全性、便捷性的CAR分子递送载体助力 CAR 细胞疗法成为研究热点。启发于自然界中膜融合过程可实现物质转运，本研究构建了一种膜融合型纳米囊泡（Fu-EVs）作为CAR分子的递送载体，通过囊泡膜与待修饰的免疫细胞膜发生融合，实现将 CAR 分子递送至免疫细胞表面，从而快速、便捷地制备出 CAR 细胞。且该囊泡为细胞外囊泡，具有生物相容性高、免疫原性低的特点。 本论文中膜融合型纳米囊泡的构建过程为：先通过瞬时转染使细胞表达膜融合蛋白（p14 FAST或VSVG），再利用表面活性剂处理使该细胞分泌携载膜融合蛋白的细胞外囊泡，即膜融合型纳米囊泡（Fu-EVs）。论文首先检测了Fu-EVs发生膜融合的条件，以及与不同细胞膜融合的效率。在此基础上，通过同时转染膜融合蛋白和 CAR 分子的表达质粒于细胞，制备得到携载CAR分子的膜融合型纳米囊泡（Fu-EVCAR）。论文中利用携载anti-CD19（αCD19）CAR分子的膜融合型纳米囊泡（Fu-EVαCD19 CAR）成功制备了CAR-T/MΦ/Jurkat细胞，并在细胞水平上证明制备的CAR-T/MΦ细胞对CD19+A20细胞具有良好的识别作用，发挥一定的杀伤或吞噬效果。随后，在动物水平上证明 Fu-EVαCD19 CAR制备的CAR-MΦ对A20皮下瘤的生长具有良好的抑制效果。 综上，本研究构建了一种安全有效的非病毒载体Fu-EVs，可将CAR分子直接递送至免疫细胞表面实现CAR细胞的制备，具备良好的生物相容性和安全性，为CAR细胞的制备提供了一种安全性高、操作简单的新策略。
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