摘要
目的: 明确超级增强子相关基因SCARB1在胃癌细胞中表达情况，探究其对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响，为胃癌治疗和预后分析提供可能的新靶点。 方法: 1.生物信息学方法（1）利用GEO数据库中胃癌细胞MKN45ChIP-seq数据绘制超级增强子图谱，通过GO分析初步确定超级增强子相关基因SCARB1为研究目标分子;（2）利用KMplotter数据库探索SCARB1表达水平与胃癌预后的关系;（3）利用GEPIA和TNMplot数据库比较SCARB1在胃癌组织和邻近正常组织中表达情况;（4）利用ExpressionAtlas数据库分析SCARB1在人胃癌细胞AGS、HGC27、MKN45中的表达情况。2.RT-qPCR和Westernblot分析和检测SCARB1在人胃黏膜上皮细胞GES1和人胃癌细胞AGS、HGC27、MKN45中的表达。3.将AGS、HGC27、MKN45各随机分为三组:分别为转染SCARB1小干扰RNA的si-SCARB1组（实验组），转染阴性siRNA序列的scramble组（阴性对照组）及不转染siRNA的mock组（空白对照组）;对各组细胞进行相应处理48h后验证干扰效率。4.克隆形成实验和CCK-8法检测SCARB1对胃癌细胞增殖的影响。5.流式细胞术检测SCARB1对胃癌细胞凋亡的影响。6.细胞划痕实验和Transwell迁移侵袭实验检测SCARB1对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响，同时Westernblot检测MMP2、MMP9蛋白的表达。7.Westernblot检测蛋白AKT、p-AKT（ser473）、PI3K的相对表达情况并评估AKT磷酸化水平。 结果: 1.生信分析结果显示:（1）MKN45细胞的超级增强子总共有489个，超级增强子相关基因总共有892个，SCARB1与超级增强子5_MACS_peak_7443_lociStitched相关，GO分析提示SCARB1可能与上皮细胞迁移和增殖有关;（2）KMplotter数据库分析得到，SCARB1高表达的胃癌患者五年总体生存率、五年首次进展生存率和五年进展后生存率均低于相对低表达患者;（3）GEPIA、TNMplot数据库分析得到，胃癌组织中SCARB1的表达高于邻近正常组织;（4）ExpressionAtlas数据库分析得到，SCARB1在AGS、HGC27、MKN45中高表达。2.RT-qPCR结果显示，AGS、HGC27、MKN45中SCARB1的mRNA相对表达量高于GES1（P＜0.05）;Westernblot结果与RT-qPCR结果一致（P＜0.05）。3.与同株细胞scramble组相比，AGS、HGC27、MKN45细胞si-SCARB1组SCARB1表达下降（P＜0.05）;Westernblot结果与RT-qPCR结果一致（P＜0.05）。4.克隆形成实验显示，下调SCARB1表达后，AGS、HGC27、MKN45细胞克隆形成率下降（P＜0.05）;CCK-8检测显示，AGS细胞si-SCARB1组在24h、48h及72h的细胞活力均低于scramble组（P＜0.05）,HGC27和MKN45细胞si-SCARB1组在48h及72h的细胞活力均低于同细胞株scramble（P＜0.05）;同株细胞scramble组和mock组的克隆形成率、细胞活力无明显差异（P＞0.05）。5.流式细胞术结果显示，下调SCARB1表达后，AGS、HGC27、MKN45细胞凋亡率增加（P＜0.05）。6.划痕实验显示，AGS细胞si-SCARB1组在24h和48h的平均划痕宽度大于同株细胞scramble组（P＜0.05），HGC27和MKN45细胞si-SCARB1组在48h的平均划痕宽度大于scramble组（P＜0.05）;transwell迁移实验显示，下调SCARB1表达后，AGS、HGC27、MKN45细胞迁移数量减少（P＜0.05），同株细胞scramble组和mock组的平均划痕宽度、细胞迁移数量无明显差异（P＞0.05）。7.Transwell侵袭实验显示，下调SCARB1表达后，AGS、HGC27、MKN45细胞侵袭数量减少（P＜0.05）,同株细胞scramble组和mock组的细胞侵袭数量无明显差异（P＞0.05）。8.Westernblot结果显示，下调SCARB1表达后，AGS、HGC27、MKN45细胞MMP2、MMP9、AKT、p-AKT（ser473）、PI3K（p110）表达均降低，AKT磷酸化水平下降（P＜0.05）。 结论: 1.SCARB1在MKN45细胞株中与超级增强子5_MACS_peak_7443_lociStitched相关。2.生物信息学提示SCARB1高表达的胃癌患者预后不良。3.SCARB1在AGS、HGC27、MKN45中高表达，且SCARB1通过PI3K/AKT信号通路促进胃癌细胞AGS、HGC27、MKN45增殖、迁移、侵袭，抑制凋亡，参与胃癌的发生发展。
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