摘要
目的:乳腺癌是全球妇女癌症死亡的主要原因，其中耐药是乳腺癌治疗的难点和热点问题。在本研究中，我们使用了一种新开发的小分子齐墩果酸化合物3-oxo-olean-12-en-28-acid(ZQL-1)研究其在乳腺癌细胞株中的抗肿瘤作用及相关分子机制。 研究方法:首先在体外实验中，采用CCK8法测试ZQL-1是否抑制三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231、激素受体阳性乳腺癌细胞MCF-7和Her-2过表达型乳腺癌细胞SK-BR-3增殖活力，并分别计算ZQL-1在三株细胞的IC50浓度。使用流式细胞术检测0，0.5*IC50,IC50,2*IC50不同浓度的ZQL-1的凋亡、周期。通过细胞划伤愈合实验检测不同浓度的ZQL-1在三种乳腺癌细胞株的细胞迁移影响。采用网络药理学方法利用PharmMapper、SwissTargetPrediction、Genecards数据库探究ZQL-1抗乳腺肿瘤的可能分子靶点。使用R软件“clusterProfiler”包等预测ZQL-1相关细胞信号通路。并使用WesternBlot法检测与细胞周期，细胞凋亡及通路有关的蛋白表达变化。 结果:ZQL-1呈浓度和时间依赖性的方式抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231、MCF-7、SK-BR-3增殖活性。MDA-MB-231细胞24h的IC50值为2.80μmol/L(95％CI:0.37-0.53),MCF-7细胞24h的IC50值为4.86μmol/L(95％CI:0.578-0.79),SK-BR-3细胞24h的IC50值为3.7μmol/L(95％CI:0.46-0.68)。与对照组相比，采用0.5*IC50,IC50,2*IC50浓度的ZQL-1处理乳腺癌细胞后，MCF-7细胞呈现明显的G0/G1期阻滞(P＜0.05)，而ZQL-1对MDA-MB-231,SK-BR-3细胞周期影响不明显(P＞0.05)。随着ZQL-1浓度的升高，周期相关蛋白CDK2、CyclinD1、CyclinE1蛋白表达在MCF-7细胞中显著减少(P＜0.05)，而在MDA-MB-231,SK-BR-3细胞中几乎没有影响(P＞0.05)。与对照组相比，采用0.5*IC50,IC50,2*IC50浓度的ZQL-1处理乳腺癌细胞后，MDA-MB-231细胞和SK-BR-3的细胞凋亡率随着ZQL-1浓度升高显著增加(P＜0.001)，MCF-7细胞凋亡无明显变化(P＞0.05)。MDA-MB-231细胞和SK-BR-3的细胞中，凋亡相关蛋白cleavedcaspase3/caspase3、cleavedcaspase7/caspase7、cleavedcaspase9/caspase9的比值呈现明显的药物浓度依赖性升高(P＜0.01),而在MCF-7细胞中无明显变化(P＞0.05)。同样，ZQL-1抑制MDA-MB-231、SK-BR-3细胞的迁移能力(P＜0.01)，而对MCF-7细胞无明显影响（P＞0.05）。网络药理学挖掘表明ZQL-1最可能的相关机制是由EGFR介导的PI3K/AKT信号通路。验证PI3K/AKT通路蛋白结果表明，与对照组相比，0.5*IC50、IC50、2*IC50浓度的ZQL-1处理的三株乳腺癌细胞的pPI3K/PI3K、pAKT/AKT的比值、pmTOR/mTOR的比值以及eIF4B蛋白表达以及均呈药物浓度依赖性降低（P＜0.05）。在MDA-MB-231和SK-BR-3细胞中，4EBP1蛋白表达呈现ZQL-1浓度依赖性升高（P＜0.05），而MCF-7细胞中，pS6K1/S6K1的蛋白表达比值随ZQL-1浓度升高而显著降低（P＜0.001）。 结论:ZQL-1通过EGFR蛋白介导PI3K/AKT通路抑制乳腺癌细胞的增殖。MDA-MB-231、SK-BR-3细胞中，ZQL-1主要通过促进细胞凋亡，抑制细胞迁移发挥抗肿瘤增殖作用，而在MCF-7细胞中主要通过阻滞细胞周期发挥抗肿瘤增殖作用。
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