摘要
目的:建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，记录大鼠神经功能缺损评分，通过异硫氰酸荧光素-葡聚糖实验、免疫组织化学、HE染色、16srDNA测序法检测检测三七总皂苷干预后缺血再灌注大鼠的肠道结构功能、肠道菌群的变化，初步探讨三七总皂苷通过肠道微生物-肠-脑轴发挥脑缺血后的神经保护作用。 方法:（1）实验动物分组及干预:将SD大鼠随机分为三组:假手术组（Sham），模型组（MCAO）和三七总皂苷组（PNS）,每个组10只。将模型组和三七总皂苷组用线栓法制作缺血性脑卒中再灌注模型（大脑中动脉闭塞2小时后取出线栓）。取出线栓2小时后参照Zea-Longa神经功能评分标准对造模大鼠进行评分，1-3分纳入实验。（2）实验检测指标:①神经功能评分记录大鼠在实验期间用药及不用药的神经损伤程度。②通过FD4实验检测大鼠肠道渗透性。③HE染色观察三七总皂苷对肠道组织病理形态的影响。④免疫组织化学对肠道组织的ZO-1和Occludin蛋白定位。⑤蛋白免疫印迹实验（WesternBlot，WB）对肠道组织的ZO-1和Occludin蛋白进行半定量分析。⑥16srDNA测序法检测肠道菌群的变化。 结果:（1）①模型组大鼠神经缺损严重，无自我恢复趋势，且神经功能评分逐渐升高，三七总皂苷治疗后，神经功能评分逐渐降低。②FD4实验发现造模后大鼠肠道渗透性增加，三七总皂苷干预后能改善肠道渗透性（P＜0.05）。③HE染色发现，与治疗组相比，模型组大鼠肠道结构破坏明显（P＜0.05）。④免疫组化显示与模型组相比，治疗组的肠道ZO-1与Occludin蛋白表达量有所增加，且具有统计学意义（P＜0.05）。⑤WB实验显示，肠道ZO-1与Occludin蛋白表达量在治疗组中明显高于模型组（P＜0.05），与组化结果趋势相同。（2）肠道菌群:①假手术组与模型组比较:假手术组主要菌群是厚壁菌门中的菌种，假手术组主要是拟杆菌门和变形菌门的菌种，拟杆菌过度增长已被确认为卒中后生物失调的标志，肠动力会减弱。②模型组与治疗组相比较:模型组主要是螺旋体门和柔膜菌门的菌种，其中密螺旋体是致病菌，治疗组主要是厚壁菌门的瘤胃球菌，能够有效分解碳水化合物，能够稳定肠道屏障、逆转腹泻等作用。 结论:三七总皂苷通过调节肠道渗透性和保护肠道屏障功能，使得肠道菌群发生变化，恢复神经功能，发挥脑缺血后的神经保护作用。
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