摘要
目的 本研究拟通过腹腔注射四氯化碳(CCl4)建立小鼠肝纤维化模型，观察不同浓度麦角硫因干预后小鼠肝纤维化进展程度，及麦角硫因对TGF-β/Smad信号通路的影响，为肝纤维化治疗提供依据。 方法 C57/BL6J小鼠随机分为油剂对照组(Control)，CCl4模型组(Mod)，CCl4+EGT-L(CCl4+麦角硫因低剂量组，5mg/kg)、CCl4+EGT-H(CCl4+麦角硫因高剂量组，10mg/kg)。6周后取小鼠肝组织及血液标本，检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)的含量，通过H&E染色及天狼星红染色等病理学检查观察小鼠肝脏及组织结构的变化，Masson染色检测肝组织胶原沉积。免疫组化法检测小鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothmuscleactin，α-SMA)，Ⅰ型胶原蛋白(CollagentypeⅠ,Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(CollagentypeⅢ,Col-Ⅲ)沉积情况，观察小鼠肝纤维化和肝星状细胞(hepaticstellatecells,HSC)活化程度。ELISA法检测小鼠血清层粘连蛋白(LN)、羟脯氨酸(HyP)的含量。利用RT-PCR检测小鼠肝脏中α-SMA、转肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素β(IL-β)、白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子(TGF-β1)、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、的表达水平。Westernblot法分析α-SMA、TGF-β1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、Smad3、p-Smad3(磷酸化的Smad3)、Smad2、p-Smad2(磷酸化的Smad2)的含量。 结果 1.与对照组相比，模型组肝纤维化小鼠血清ALT、AST、TBIL、LN和Hyp显著升高(P＜0.01)。CCl4+EGT-L组及CCl4+EGT-H组较Mod组ALT、AST、TBIL、LN和Hyp均明显降低，有统计学意义(P＜0.05)。 2.通过H&E染色可以发现油剂对照组未发生病理性变化，组织细胞完好。Mod组发现肝细胞变性坏死，脂肪样变性，肝小叶大小不一，汇管区肝细胞炎性浸润，CCl4+EGT-L组及CCl4+EGT-H组小鼠肝纤维化程度明显减轻，肝细胞坏死减轻，以炎性浸润为主。Masson染色及天狼星红染色中，Mod组观察到大量的胶原纤维沉积，CCl4+EGT-L组及CCl4+EGT-H组中胶原沉积相对较少。 3.RT-PCR检测CCl4模型组小鼠肝组织Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、IL-β、IL-6、α-SMA、TGF-β、TNF-α较对照组显著升高(P＜0.05)，CCl4+EGT-L组及CCl4+EGT-H组较CCl4模型组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、IL-β、IL-6、α-SMA、TGF-β、TNF-α均降低(P＜0.05)。 4.Westernblot法分析CCl4模型组小鼠肝组织Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β1、Smad3、Smad2、p-Smad3、p-Smad2表达较对照组显著升高(P＜0.05)。CCl4+EGT-L组及CCl4+EGT-H组较CCl4模型组Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、α-SMA、TGF-β、Smad3、Smad2、p-Smad3、p-Smad2表达均减少(P＜0.05)。 5.免疫组化染色检测Control组，Mod组，CCl4+EGT-L(5mg/kg)组，CCl4+EGT-H(10mg/kg)组小鼠肝组织中胶原蛋白α-SMA,Col-Ⅰ，Col-Ⅲ表达水平。EGT可以降低这些胶原的阳性表达。 结论 1.麦角硫因对CCl4诱导的小鼠肝纤维化具有保护作用，可有效减轻肝脏损伤。 2.麦角硫因可以抑制促炎因子IL-β、IL-6、TGF-β、TNF-α的产生，从而抑制肝脏炎症反应，减轻肝纤维化。 3.麦角硫因通过下调TGF-β/Smad信号通路发挥抗纤维化作用。
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