摘要
背景和目的 随着人民生活水平的不断提高，以及口腔种植技术的高速发展，种植修复已逐渐成为牙列缺损和牙列缺失患者首选的诊疗方案。患者牙槽骨骨量不足是临床上种植修复中的常见问题。临床上种类繁多的骨移植材料为患者提供了骨缺损的修复，但是远期修复效果参差不齐。合适的骨移植材料在临床应用中显得越发重要，对种植修复的术后效果有重大影响。本实验意在研究超声盐酸脱矿的人牙骨移植材料对小鼠巨噬细胞RAW264.7的增殖和极化的影响来探讨人牙骨移植材料与小鼠巨噬细胞RAW264.7的生物相容性。 方法 收集新鲜的人离体牙，高速手机喷水去除牙釉质、色素沉着、牙石和牙髓组织。制备成大小相近的块状人牙骨移植材料，分成两组，分别是未经处理的块状人牙骨移植材料和VacuaSonic真空超声联合盐酸处理的块状人牙骨移植材料，即超声脱矿组。扫描电镜观察两组材料形貌。按100mg人牙骨移植材料制取1mL浸提液的浓度制备浸提液，将两组浸提液分别与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7共培养1天、3天、5天后，观察小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分化。用两组浸提液分别与小鼠单核巨噬细胞RAW264.7共培养，通过MTT和CCK-8检测细胞培养1天、3天、5天的细胞增殖。通过ELISA分别检测两组浸提液处理后的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7分泌炎性因子IL-10的表达水平。裂解巨噬细胞RAW264.7,提取巨噬细胞总RNA,反转录，mRNA变成cDNA，通过cDNA做PCR,采用qPCR和WesternBlot技术分别检测M1极化标志物IL-1α、IL-1β转录和蛋白的水平以及M2极化标志物ARG-1、CD163转录和蛋白的水平。 结果 电镜下，相较于未处理的块状人牙骨移植材料，VacuaSonic超声盐酸脱矿的块状人牙骨移植材料牙本质小管充分打开、增宽，接触面积增大。光镜下，相较于未处理的块状人牙骨移植材料，VacuaSonic超声盐酸脱矿的块状人牙骨移植材料浸提液与巨噬细胞RAW264.7共培养，巨噬细胞RAW264.7分化的形态较收拢，伪足较短。未处理人牙骨移植材料浸提液培养的巨噬细胞呈长梭型，伪足较长。通过MTT和CCK-8实验检测了未处理人牙骨移植材料浸提液和VacuaSonic超声盐酸脱矿浸提液分别与巨噬细胞共培养1天、3天、5天的光吸收值，均显示两组材料光吸收值3天始表现出差异性，VacuaSonic超声盐酸脱矿组光吸收值明显高于未处理组，促进细胞增殖。通过ELISA检测显示VacuaSonic超声盐酸脱矿浸提液与巨噬细胞RAW264.7共培养后，巨噬细胞分泌的IL-10水平高于未处理人牙骨移植材料浸提液。采用qPCR和WesternBlot实验检测巨噬细胞M1型和M2型极化标志物转录和蛋白的表达水平，提示VacuaSonic超声脱矿的人牙骨移植材料组M2型标志物ARG1和CD163转录和蛋白的表达水平高，M1型标志物IL-1α和IL-1β转录和蛋白的表达水平低，差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 1、VacuaSonic超声盐酸脱矿的块状人牙骨移植材料促进巨噬细胞RAW264.7分化，使巨噬细胞由M1型向M2型转化。 2、VacuaSonic超声盐酸脱矿的块状人牙骨移植材料浸提液培养巨噬细胞RAW264.7分泌的IL-10表达水平更高。 3、VacuaSonic超声盐酸脱矿的块状人牙骨移植材料可促进巨噬细胞增殖，有良好的生物相容性。
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