摘要
背景:特应性皮炎(Atopicdermatitis，AD)是一种慢性、复发性的炎症性皮肤病。近年AD的发病率不断上升，成为全球疾病负担最重的非致命性疾病之一，严重影响患者的生命质量和生活质量。在遗传与环境因素共同作用下，皮肤屏障功能障碍、免疫反应紊乱、皮肤微生物群紊乱等共同导致AD发病。其中，皮肤屏障功能障碍是AD发病的核心因素。因此，探索皮肤屏障破坏的发生机制以及恢复皮肤屏障功能一直是近些年来AD领域的研究热点和难点。目前，有关AD发病机制及治疗靶点的相关研究中，采用肿瘤坏死因子α(Tumornecrosisfactorα,TNF-α)/干扰素γ(Interferonγ,IFN-γ)刺激后的HaCaT细胞是目前比较公认的诱导模拟AD炎症环境的体外细胞模型。肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TNF-likeweakinducerofapoptosis,Tweak)是一种炎症因子，参与了多种炎症性皮肤病。有研究表明Tweak通过唯一受体成纤维细胞生长因子(Fibroblastgrowthfactorinducible14，Fn14)诱导早期反应蛋白促进AD的免疫炎症。但是，到目前为止，关于Tweak/Fn14与AD患者皮肤屏障功能障碍及皮肤屏障蛋白表达下调的相关性研究尚未见报道。 目的:探索TNF-α/IFN-γ诱导的HaCaT细胞屏障蛋白表达的变化，及其与Tweak/Fn14的相关性。 方法:培养HaCaT细胞，加入TNF-α/IFN-γ共同培养24小时，构建类似AD炎症的体外细胞模型。不加入任何处理为空白对照组、只加入TNF-α/IFN-γ为对照组。实验组为在该细胞模型的基础上，更换培养基，并加入rTweak(重组人tweak蛋白)25、50ng/ml继续共同培养24小时。到指定时间搜集细胞蛋白，进行蛋白定量并开展蛋白免疫印迹分析法(Westrenblot,WB)实验。使用WB法检测并比较Fn14、丝聚合蛋白(Filaggrin,FLG)、内披蛋白(Involucrin，IVL)、兜甲蛋白(Loricrin，LOR)在对照组、实验组之间表达水平的差异。 结果: 1.rTweak在10-50ng/ml浓度范围内不影响HaCaT细胞活力; 2.TNF-α/IFN-γ刺激下调HaCaT细胞Fn14表达; 3.TNF-α/IFN-γ刺激、rTweak刺激对HaCaT细胞屏障蛋白表达的影响 (1)TNF-α/IFN-γ刺激对HaCaT细胞FLG、LOR、IVL表达有下调。 (2)一定浓度的rTweak(25、50ng/ml)刺激上调了TNF-α/IFN-γ诱导的HaCaT细胞FLG表达。 (3)rTweak浓度为25、50ng/ml时，进一步下调TNF-α/IFN-γ诱导的HaCaT细胞LOR的表达。 (4)rTweak浓度为25、50ng/ml时，进一步下调TNF-α/IFN-γ诱导的HaCaT细胞IVL表达。 结论: (1)TNF-α/IFN-γ刺激使HaCaT细胞FLG、LOR、IVL表达下调，同时Fn14表达也下调; (2)在TNF-α/IFN-γ诱导HaCaT细胞后加入rTweak共培养，在一定浓度范围内FLG的表达上调，HaCaT细胞的LOR、IVL的表达进一步下调; (3)TNF-α/IFN-γ诱导的HaCaT细胞LOR、IVL的表达下调可能与Tweak/Fn14相关，而FLG的表达下调则与Tweak/Fn14无相关性。
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