摘要
目的:研究FSCN1在肝细胞癌中的表达水平及其临床意义，并探究FSCN1和HIF-1α表达的相关性，初步探讨FSCN1影响肝细胞癌侵袭转移的分子机制。 方法:(1)从TCGA数据库中获取数据集，通过R语言和相关数据分析包，分析FSCN1mRNA和HIF-1αmRNA在肝细胞癌和匹配的癌旁正常组织中的表达水平和相关性，运用实时荧光定量PCR检测27例临床样本中二者的表达水平予以验证，用免疫组织化学方法检测FSCN1蛋白在27例肝细胞癌组织及匹配的癌旁正常组织中的表达水平，采用Spearman相关系数法分析FSCN1mRNA和HIF-1αmRNA表达的相关性，采用Fisher确切概率法分析FSCN1表达与临床参数的关联性;(2)构建siRNA-FSCN1脂质体载体(引物序列,siRNA组:GAAUGCCAGGCUGCUACUUUTNegativeconcrol:(NC组)GAACCAUGUAGUUGAGGUCATT)，培养HepG2肝癌细胞系，设对照组(NC)和实验组(siRNA)，对照组转染以无义序列GAACCAUGUAGUUGAGGUCATT为模板的脂质体载体，实验组转染以GAAUGCCAGGCUGCUACUUUT序列为模板的脂质体载体，沉默HepG2细胞中的FSCN1基因，采用实时荧光定量PCR和Westernblot检测检FSCN1的mRNA和蛋白表达量予验证转染效率，划痕-愈合实验分析沉默FSCN1基因对HepG2细胞迁移能力的影响，运用Westernblot检测EMT指标N-Cadherin、E-Cadherin、MMP-9的表达水平，分析沉默FSCN1对HepG2细胞发生EMT的影响。 结果:(1)生物信息学分析结果显示，在TCGA数据库中，相较于癌旁正常组织，FSCN1mRNA在肝细胞癌组织中表达上调(P＜0.01)，HIF-1αmRNA在肝细胞癌组织中表达亦上调(P＜0.05,)，且FSCN1和HIF-1α的mRNA表达存在正相关关系，Spearman相关系数r-0.54,P＜0.01，差异具有统计学意义。(2)验证实验发现，相较于癌旁正常组织，FSCN1mRNA在肝细胞癌组织中表达上调(上调例数:下调例数=19∶8),P＜0.05,差异具有统计学意义，与生物信息学分析结果一致，HIF-1αmRNA在肝细胞癌组织中表达上调(上调例数:下调例数=15∶12),但P＞0.05,差异无统计学意义;进一步验证发现，FSCN1mRNA和HIF-1αmRNA在肝细胞癌中的表达亦存在正相关关系，Spearman相关系数r=0.40,P＜0.05,具有统计学意义，与生物信息学分析结果一致。(3)分析FSCN1mRNA表达水平与肝细胞癌患者临床参数的关联性发现,FSCN1mRNA表达水平与AFP(P＜0.05)呈正相关，与病理分化程度(P＜0.05)呈正相关，而与患者年龄、性别、HBV感染、肝硬化、肿瘤大小、肿瘤个数、肿瘤T分期、肿瘤微血管侵犯无关;分析FSCN1mRNA和HIF-1αmRNA共表达与肝细胞癌患者临床参数的关联性发现，其与微血管侵犯(P＜0.05)呈正相关，而与患者年龄、性别、HBV感染、AFP、肝硬化、肿瘤大小、肿瘤个数、肿瘤T分期、肿瘤微血管侵犯无关。(4)FSCN1蛋白在细胞质中表达，FSCN1蛋白在肝细胞癌组织中的阳性表达率(88.9％)高于癌旁正常组织中的阳性表达率(44.5％),P＜0.001,二者差异具有统计意义。分析FSCN1蛋白表达与临床参数的关联性发现，其与年龄、性别、HBV感染、肝硬化、肿瘤T分期、肿瘤个数、肿瘤微血管侵犯无关，但与肿瘤大小相关(P＜0.05)。 在siRNA-FSCN1转染实验中，相较于对照组(NC),实验组(siRNA)FSCN1的mRNA(P＜0.01)和蛋白(P＜0.001)表达均下调，差异具有统计学意义;划痕愈合实验发现，相较于对照组(NC),实验组(siRNA)HepG2细胞的迁移率下调(24h，P＜0.001;48h,P＜0.001),差异具有统计学意义;沉默FSCN1基因后，Westernblot检测EMT指标发现，相较于对照祖(NC),实验组(siRNA)中HepG2细胞中E-Cadherin表达上调(P＜0.01),N-Cadherin(P＜0.01)和MMP-9(P＜0.05)表达下调，差异具有统计学意义。 结论:(1)FSCN1mRNA和HIF-1αmRNA在肝细胞癌组织中的表达高于癌旁组织，提示进展期肝细胞癌组织中普遍存在缺氧现象，FSCN1和HIF-1α的mRNA表达呈正相关关系，提示FSCN1和HIF-1α可能存在调控关系;(2)FSCN1mRNA的表达与AFP、组织病理分化程度正相关，提示FSCN1mRNA高表达可能与肝癌的恶性特征相关。FSCN1mRNA和HIF-1αmRNA共表达与微血管侵犯显著正相关，提示FSCN1mRNA和HIF-1αmRNA的共表达可能与肝癌的侵袭迁移相关。FSCN1蛋白表达与肝癌患者的肿瘤大小呈正相关，提示FSCN1可能与肝癌细胞的骨架结构改变相关;(3)沉默FSCN1基因后,HepG2细胞迁移率下降，提示FSCN1可能是促进HepG2细胞转移的关键分子。沉默FSCN1后，E-Cadherin表达上调，N-Cadherin和MMP-9表达下调，提示FSCN1可能是通过促使HepG2细胞发生EMT，从而增强HepG2细胞的转移能力。FSCN1有望成为一个评估HCC发生发展的分子标志物。
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