基于调控METTL3介导的m6A修饰探讨鳖龙软肝汤抑制HBV原发性肝癌细胞增殖、迁移的作用机理

扫码查看

原文链接

NETL

中文摘要：目的:通过研究鳖龙软肝汤对METTL3介导m6A修饰的调控，探索其对HBV相关原发性肝癌细胞增殖和迁移的影响，明确鳖龙软肝汤治疗HBV相关原发性肝癌的潜在机制。方法:将15只健康的成年SD大鼠分成空白血清组、鳖龙软肝汤含药血清低剂量组、鳖龙软肝汤含药血清中剂量组，根据人与动物体表面积-等效剂量换算方法，空白组按照剂量灌胃生理盐水，鳖龙软肝汤组按照剂量灌胃鳖龙软肝汤，每天2次，连续给药3天，1％戊巴比妥钠麻醉后，腹主动脉采血，制备含药血清。用CCK-8法、细胞划痕实验检检测含药血清对HepG2.2.15细胞增殖、迁移能力的影响，用WesternBlot、qPCR检测METTL3、SOCS2蛋白及mRNA的表达水平，用m6ARNA甲基化试剂盒检测其m6A修饰水平。结果: 1.CCK-8检测:相较于空白血清组，HepG2.2.15细胞经过鳖龙软肝汤含药血清（低剂量、中剂量）处理24h和48h后，各浓度组组间细胞增殖率差异有统计学意义（p＜0.05），处理72h后，低剂量组细胞增殖率差异有统计学意义（p＜0.001）,中剂量组细胞增殖率差异没有统计学意义（p＞0.05）。且鳖龙软肝汤含药血清处理组（低剂量、中剂量）在各时间点的增殖率均低于空白组，而鳖龙软肝汤含药血清处理组之间，低剂量组增殖率在各时间点均低于中剂量组，尤其以低剂量组干预48h时增殖率最低。 2.细胞划痕实验:HepG2.2.15细胞经鳖龙软肝汤含药血清处理48h后，细胞迁移率稍下降，但各浓度组间差异没有统计学意义（p＞0.05）。与空白血清组比较，经鳖龙软肝汤含药血清处理72h后，低剂量组、中剂量组迁移率均有所下降，低剂量组的差异有统计学意义（P＜0.05），而中剂量组，迁移率虽有所下降，但其差异无统计学意义（p＞0.05）,细胞划痕试验表明HepG2.2.15细胞经鳖龙软肝汤低剂量含药血清处理72h能抑制细胞的迁移。 3.qPCR检测:与空白血清组比较，经鳖龙软肝汤含药血清处理后，METTL3mRNA表达量显著降低，差异有统计学意义（P＜0.0001）,含药血清各组差异不明显（P＞0.05）;与之相反的是，SOCS2出现显著上升，差异有统计学意义（P＜0.0001）,且低剂量组高于中剂量组（P＜0.0001）。 4.WB检测:与空白血清组比较，经鳖龙软肝汤含药血清处理后，METTL3蛋白表达量显著降低，差异有统计学意义（P＜0.0001）,同时，低剂量含药血清组蛋白表达量明显高于中剂量组（P＜0.0001）;与之相反的是，SOCS2蛋白表达量有所上升，差异有统计学意义（P＜0.05）。 5.m6A甲基化定量检测:与空白血清组相比，METTL3介导的m6A修饰水平在低剂量含药血清处理后的HBV相关原发性肝癌细胞中明显下降，差异有统计学意义（P＜0.001）,在中剂量含药血清处理后的HBV相关原发性肝癌细胞中下降，差异有统计学意义（P＜0.01）,且含药血清各组之间，低剂量组的m6A修饰水平低于中剂量组（P＜0.01）。结论: 1.鳖龙软肝汤含药血清能抑制HBV相关原发性肝癌细胞的增殖和迁移。 2.鳖龙软肝汤含药血清能下调HBV相关原发性肝癌细胞中METTL3表达，上调SOCS2的表达水平，降低m6A修饰水平。 3.鳖龙软肝汤含药血清对HBV相关原发性肝癌细胞增殖和迁移的抑制作用可能与METTL3介导的m6A修饰水平下降有关。

作者：

刘彬彬

展开 >

关键词：

肝细胞癌鳖龙软肝汤乙型肝炎病毒 METTL3 SOCS2 m6A甲基化

授予学位：

硕士

学科专业：

中医内科学

导师：

伍玉南

学位年度：

2023

学位授予单位：

湖南中医药大学

语种：

中文

中图分类号：

R73