摘要
目的: 白屈菜红碱(chelerythrine,CHE)是一种生物碱，研究表明CHE在多种癌症中具有较好的抗癌活性。但国内外目前关于CHE对卵巢癌的治疗作用鲜有报道。因此本研究拟通过细胞实验、动物实验观测CHE的抗卵巢癌作用，并利用转录组测序探究CHE治疗卵巢癌的分子机制并进行验证。 方法: 1.CHE对卵巢癌细胞A2780和SKOV3功能的影响 通过CCK-8实验和克隆形成实验检测CHE对卵巢癌细胞A2780和SKOV3增殖的影响;通过细胞划痕实验和Transwell细胞迁移和侵袭实验检测CHE对卵巢癌细胞A2780和SKOV3迁移和侵袭能力的影响;通过AnnxinⅤ/PI染色实验检测CHE对A2780和SKOV3细胞凋亡的影响。 2.CHE对卵巢癌细胞A2780移植瘤裸鼠的药效实验 建立卵巢癌细胞A2780裸鼠移植瘤模型并随机分组，给药处理21天后，分离瘤体和脏器，通过HE染色观察组织形态。 3.通过转录组测序探究CHE治疗卵巢癌的分子机制并进行相关验证 通过转录组测序探究CHE治疗卵巢癌的潜在分子机制，并通过qRT-PCR和WB实验对潜在信号通路的相关基因的mRNA和蛋白的表达量进行验证。 结果: 1.CHE对卵巢癌细胞A2780和SKOV3功能的影响 CCK-8实验和克隆形成实验结果表明CHE对A2780和SKOV3细胞增殖的抑制作用与时间和浓度呈现出正相关的趋势;细胞划痕实验、Transwell细胞迁移实验及侵袭实验结果表明CHE可以抑制A2780和SKOV3的迁移及侵袭;通过AnnexinⅤ/PI染色实验观察到CHE能够诱导A2780和SKOV3的凋亡。 2.CHE对卵巢癌细胞A2780移植瘤裸鼠的药效试验 动物实验结果表明CHE具有抑制卵巢癌细胞A2780裸鼠皮下移植瘤的生长且无明显肝肾毒性。 3.利用转录组测序技术探究CHE治疗卵巢癌潜在分子机制并进行验证 转录组测序的的KEGG富集分析结果表明CHE抗肿瘤作用可能与Ras/Raf/MAPK信号通路有关。qRT-PCR实验的结果发现CHE组的Ras，Raf,ERK,RSK和Bcl-XL的mRNA表达量下降，Caspase-3的mRNA表达量上升。细胞的WB实验的结果发现CHE组的p-MEK,p-ERK,p-RSK以及Bcl-XL,p-Bad蛋白表达量下降，cleaved-caspase-3蛋白表达量上升。裸鼠瘤体的WB实验结果发现CHE组的p-MEK,p-ERK以及Bcl-XL表达量下降，cleaved-caspase-3蛋白表达量上升。 结论: 1.CHE能够抑制卵巢癌细胞A2780和SKOV3的增殖、迁移、侵袭，诱导其凋亡。 2.CHE能够在体内抑制卵巢癌细胞A2780裸鼠皮下移植瘤的生长。 3.CHE抗卵巢癌的作用机制可能与Ras/Raf/MAPK信号通路有关。
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