摘要
土木香（InulaheleniumL.），又被称作祁木香，是菊科旋复花属（InulaL.）植物中的一种，是一种多年生草本植物，具有味辛、苦，性微温等特点。土木香的根可供药用，在藏、蒙地区是一种民间的常用药材，具有利尿、健胃、祛痰以及驱虫等多种功效。目前，已经从土木香这种植物中分离得到了土木香内酯（AL）、异土木香内酯等多种成分，这些成分具有抗肿瘤活性、抗菌活性、抗炎活性、降血糖功效、驱虫作用和镇痛作用等多种生物活性，具有很好的药用开发前景。其中，土木香内酯（AL）与异土木香内酯是一对结构异构的倍半萜内酯，属于桉叶烷型倍半萜内酯。土木香内酯通过靶向多个细胞信号通路来诱导细胞凋亡。土木香内酯是潜在的抗癌候选药物,但需要更多的研究和临床试验来确定其在细胞内的具体作用位点和衍生物靶点,以充分了解其抗肿瘤机制,进一步验证其在癌症化疗中的作用。 耐药性是人类恶性肿瘤预后差、死亡率高的主要原因。卵巢癌治疗中很多癌细胞对铂产生了耐药性。天然化合物与铂类药物联合治疗为肿瘤化疗提供了一种新的策略。近年来我们发现土木香内酯对顺铂在卵巢癌模型中的抗肿瘤作用具有敏感性。目前尚不清楚AL是如何与顺铂相互作用并在卵巢癌模型中逆转铂耐药的。本文首先通过台盼蓝染色法，对AL于顺铂联合作用的抗肿瘤效果进行研究，初步确定了实验的药物浓度以及药物作用时间，并在此条件下，AL与顺铂呈现出对SKOV-3细胞细胞活性抑制的协同效果。接着我们通过细胞克隆形成实验发现AL与顺铂联合作用能够抑制SKOV-3细胞的增殖能力。通过Hoechst33258染色法对细胞凋亡小体的检测以及单细胞凝胶电泳试验（彗星实验）对细胞DNA损伤的检测，我们发现AL与顺铂联合作用能够显著的促进细胞的凋亡并且造成严重的DNA损伤。因此，我们对细胞中凋亡相关蛋白的表达进行了进一步的检测，发现AL与顺铂联合作用能够促进某些促凋亡蛋白的表达，并且抑制某些抑凋亡蛋白的表达。另外，我们还检测了细胞中葡萄糖水平和乳酸水平，以此来反应SKOV-3细胞中糖酵解的水平。结果显示AL与顺铂联合作用能够降低细胞中葡萄糖及乳酸的含量，推测AL与顺铂联用使细胞中糖酵解水平降低，从而可以抑制了细胞的增殖，并促进了SKOV-3细胞的凋亡，而达到逆转卵巢癌SKOV-3细胞对顺铂的耐药性。我们对糖酵解相关蛋白HK2、PKM2进行了检测。此外，我们还对细胞内活性氧（ROS）水平和GSH水平进行了检测。一些研究表明，在一些肿瘤治疗中，顺铂能诱导肿瘤细胞剧烈产生ROS，从而触发下游凋亡通路的激活，然而对于顺铂耐药的肿瘤细胞而言，细胞内往往含有较高水平的GSH含量用于抵消因药物诱导而产生的细胞氧化应激反应，细胞内ROS的产生可能是由于GSH的耗竭所引起。本次实验结果显示，AL与顺铂联用显著降低了SKOV-3细胞内GSH的水平，并且促进了ROS的产生，推测AL与顺铂联用增强了细胞的氧化应激反应，从而触发下游凋亡通路的激活，进一步导致了细胞的凋亡，因此可以达到逆转SKOV-3细胞对顺铂耐药性的目的。 通过以上实验结果，我们发现AL和顺铂的联合治疗可以抑制糖酵解，与此同时增强细胞的活性氧（ROS）水平，进而导致细胞凋亡，减少细胞增殖，导致细胞死亡，最终逆转卵巢细胞系的耐药性。因此，AL与顺铂联合治疗可能是一种增强化疗、逆转卵巢癌铂耐药的新治疗策略。
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