摘要
利用小分子药物的靶向化疗已成为精准医学治疗癌症的重要手段，与常规化疗相比，靶向治疗剂具有高效的抗肿瘤作用。研究发现肿瘤细胞表面存在过表达的叶酸（FA）受体，可用于实现FA靶向治疗效果。肿瘤细胞内P-糖蛋白（P-gp）的过表达是化疗药物产生多药耐药（MDR）的主要原因，粉防已碱（TET）作为P-gp抑制剂，能有效的降低P-gp的过表达并减少化疗药物的外排。本研究通过FA修饰单甲氧基聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸（mPEG-PLGA）合成靶向药物载体材料（mPEG-PLGA-FA）,联合负载抗肿瘤药物紫杉醇二聚体（PTX2）和TET。TET通过与P-gp上的活性位点结合逆转MDR,然后PTX2的二硫键（S-S）在肿瘤细胞中还原性谷胱甘肽（GSH）的作用下断裂释放紫杉醇（PTX）。通过两种药物的控制释放实现靶向逆转肿瘤细胞MDR并抑制肿瘤细胞的增殖。主要研究内容及结果如下: 1、使用mPEG-PLGA与丁二酸酐（SA）开环聚合制备mPEG-PLGA-COOH,随后与FA通过EDC/NHS酰胺合成法制备两亲性共聚物mPEG-PLGA-FA;PTX与二硫代二丙酸（DTDP）的EDC/DMAP酯化反应制备PTX2，通过红外光谱和核磁共振氢谱证明mPEG-PLGA-FA和PTX2的合成。 2、通过溶剂挥发法制备mPEG-PLGANPs、mPEG-PLGA-FANPs空白纳米胶束，使用动态光散色分析其临界胶束浓度（CMC）值为0.1mg/mL,紫外分析pH敏感范围为6～7,溶血率评估其在0.01g/L～1g/L溶血率为2％以下，具有较高的血液安全性。通过溶剂挥发法制备mPEG-PLGA/PTX2NPs、mPEG-PLGA-FA/PTX2NPs、mPEG-PLGA/PTX2/TETNPs、mPEG-PLGA-FA/PTX2/TETNPs载药胶束，使用紫外光谱法和高效液相色谱法进行包覆测试及包封率（EE）和载药量（DL）的计算，mPEG-PLGA-FA/PTX2/TETNPs中PTX2的EE和DL分别为49.85％、4.75％,TET的EE和DL分别为76.30％、7.09％。使用透射电镜（TEM）观察其形貌呈球形单分散状态，并通过马尔文粒度仪监测了其粒径，证明其具有良好的稳定性。采用高效液相色谱分析不同pH下药物的释放效果，结果显示载药胶束在pH为6的条件下更有利于药物的释放。 3、采用荧光酶标仪测定不同药物系统诱导细胞内活性氧（ROS）的含量，结果显示具有靶向功能的载药胶束能够增加TET在细胞内的聚集，诱导更高水平的ROS。使用共聚焦显微镜观察细胞荧光摄取实验说明TET的加入能有效减少荧光分子罗丹明123（RH123）的泵出，逆转MDR，同时FA靶向胶束能增加细胞内RH123的聚集，表现出强荧光。 4、通过体外和体内实验分析评估mPEG-PLGA-FA/PTX2/TETNPs共载药胶束对HeLa细胞活性及小鼠肿瘤生长抑制能力的影响，结果表明mPEG-PLGANPs和mPEG-PLGA-FANPs表现出良好的生物相容性，TET的加入能有效协同肿瘤治疗效果，FA靶向胶束处理的实验组具有更低的细胞活性，对肿瘤的抑制能力更高。
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