摘要
目的: 创面修复后期即角质生成细胞和成纤维细胞发挥主要生物学功能的时期，作为主要细胞外基质蛋白的Ⅰ和Ⅲ型胶原等可以激动胶原受体结合发生基质重塑，YAP作为细胞生长发育中的机械力感知器，在多种癌症进展和纤维化疾病中发挥转录因子功能，但在全层缺损的创面修复中与基质重塑和对细胞生物学功能的影响尚不清楚。本研究探究了 YAP对细胞增殖、迁移以及基质重塑的影响机制，为纤维化或修复过度的病理全层皮损修复寻找有效的生物标志和干预靶点提供线索和依据。 方法: 我们收集不同创面修复的临床患者组织，包括慢性创面、正常皮肤和病理性瘢痕，多种染色观察不同创面组织学特征;使用Qrt-PCR、WB、IHC、IF等方法探讨胶原、胶原受体DDR2以及YAP/p-YAP在患者标本和提取的原代Fbs中的表达，并通过CCK8、划痕实验、鬼笔环肽染色分析正常皮肤Fbs和瘢痕Fbs增殖、迁移等。同时利用质粒转染和慢病毒包装表达载体改造人皮肤成纤维细胞HSF-1,并分析YAP、ECM主要胶原表达和分泌TGF-β 1等情况。 结果: 在不同创面组织中，瘢痕真皮层的Col Ⅰ/Col Ⅲ比例增加，YAP核表达增多，而慢性创面表皮缺损，YAP核表达较少。而在原代Fbs体外培养过程中，早代次瘢痕Fbs较正常Fbs mRNA表达层次YAP、Col Ⅰ和Col Ⅲ的表达增加，而随着传代次数的增加，相应表达反而明显下降，这意味着瘢痕Fbs可能受ECM微环境的影响更大。改造YAP后的HSF-1中，Col Ⅰ和Col Ⅲ表达和增殖、迁移和分泌TGF-β 1表型较对照组皆有变化。在共表达DDR2和YAP的293T体系中，IP结果提示两者无明显直接相互作用，但在Col Ⅰ刺激下两者蛋白层次表达变化，可能存在调控作用。 结论: 在主要ECM蛋白Col Ⅰ刺激下，YAP信号发生活化，这一过程影响细胞增殖、迁移和分泌，在临床病理创面修复中甚至可能存在持续刺激基质重塑情况。本研究初步探究了 YAP信号改变对基质重塑与细胞增殖、迁移的反馈调节机制。本研究发现这一现象，对创面修复后期基质重塑在细胞和ECM之间进行的反馈调控有了新的认识。本课题为创面生理性愈合奠定了新的实验基础以及为病理性瘢痕治疗提供了新的方法与思路。
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