摘要
目的：肿瘤内血管畸形，导致局部渗透压偏高，影响化疗或靶向药物在肿瘤部位的蓄积。仑伐替尼（Len）作为多靶点酪氨酸激酶抑制剂，通过抑制肿瘤细胞增殖和血管生成来发挥作用，并具有调节免疫微环境的功能。然而，Len本身疏水性较强，口服生物利用度较低，单药抗肿瘤疗效欠佳。阿霉素（Adr）是临床常用化疗药物，能够诱导肿瘤发生免疫原性死亡，继而释放抗原激活抗肿瘤免疫应答。因此，本研究提出利用配位自组装结构优势构建Len/Adr自组装纳米药物，用于肝癌系统性化疗-免疫治疗，以期提高对肝细胞癌的治疗效果。 方法：利用Len、Adr、三价铁离子（Fe3+）和茶多酚（EGCG），通过超分子自组装与配位作用制备Fe-Len/Adr@EGCG纳药；通过粒径分布、电位、尺寸形貌、吸收光谱、红外光谱等对材料进行表征；检测Fe-Len/Adr@EGCG药物负载与释放情况，验证pH响应性；评估肝癌细胞对Fe-Len/Adr@EGCG的摄取并检测细胞毒性；评估材料对程序性死亡受体配体（PD-L1）表达的影响；构建C57BL/6小鼠原位肝癌模型，探究Fe-Len/Adr@EGCG的肿瘤富集与抗肿瘤效果并分析免疫调节机制；检测小鼠体重变化与血常规等，评估安全性；构建患者来源类器官（PDO），鉴定后用于进一步评估Fe-Len/Adr@EGCG体外抗肿瘤效果。 结果：Fe-Len/Adr@EGCG具备良好的水溶液稳定性以及较高的总药物负载效率（42.8wt%）；Len与Adr在pH6.5条件下96h的累积释放量分别达到40.3%和47.2%，显著高于pH7.4环境下，具有pH响应性。在体外实验中发现，Fe-Len/Adr@EGCG能有效抑制肝癌细胞增殖与迁移，降低肿瘤细胞的PD-L1蛋白的表达水平。系统性给药48h内，Fe-Len/Adr@EGCG能高效的富集于肿瘤内；对原位肝癌肿瘤治疗效果显示，Fe-Len/Adr@EGCG能够促进肿瘤血管正常化，缓解肿瘤局部乏氧，增强钙网蛋白（CALR）暴露，提高CD8+T细胞的浸润，减少调节性T细胞（Tregs）的聚集，下调肿瘤PD-L1的表达，进而显著抑制原位肿瘤生长达42天（3/6），并提高小鼠远期生存率（4/6）；治疗过程中的小鼠体重及肝肾功能均没有显著变化或异常，提示Fe-Len/Adr@EGCG具备良好的安全性。此外，Fe-Len/Adr@EGCG在4/5的类器官模型中均表现出优异的抗肿瘤效果。 结论：本研究制备Fe-Len/Adr@EGCG在有效杀伤肿瘤细胞的同时，促进血管正常化，增强体内的抗肿瘤免疫应答，实现系统性化疗-免疫协同治疗，在原位肝癌模型与PDO模型中均表现出优异的抗肿瘤效果，为肝癌治疗提供新策略。
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