摘要
【目的】 趋化因子配体20【Chemokine(C-Cmotif)ligand20,CCL20】是趋化因子CC亚家族的一员，可以通过与其受体结合来调节白细胞的活动，从而影响免疫系统的功能。肝缺血再灌注损伤（hepaticischemia-reperfusioninjury,HIRI）是影响肝移植（livertransplantation,LT）预后的重要因素。本研究明确小鼠HIRI后CCL20的表达，探究其对HIRI的作用和部分相关机制，为减轻HIRI和改善LT预后提供新的治疗思路。 【方法】 1.基于小鼠HIRI模型，设定再灌注时间对其进行分组比较。通过血清转氨酶浓度和HE染色组织病理学观察缺血再灌注（ischemiareperfusion,IR）对肝脏的影响。明确HIRI随着再灌注时间变化损伤严重程度也随之发生改变并造模成功。 2.使用GEO数据库进行生信分析筛选HIRI中差异表达基因（differentiallyexpressedgenes,DESs），明确研究对象为CCL20。通过WB，qRT-PCR和ELISA在小鼠HIRI模型中CCL20表达水平进行验证。 3.通过尾静脉注射，利用shRNA敲低CCL20在小鼠体内的表达，根据qRT-PCR和绿色荧光蛋白（greenfluorescentprotein,GFP）的表达验证转染效率。明确转氨酶，HE染色和炎症因子的转录的变化确认CCL20在HIRI发挥的作用。通过WB初步探究CCL20直接作用于HIRI的潜在机制。 【结果】 1.小鼠HIRI后血清转氨酶急剧升高，在再灌注6-12h到达顶峰，24h之后开始缓慢降低。组织病理学HE染色发现IR-12h组出现较为严重的肝细胞坏死，肝窦扩张和炎细胞浸润。IR-24h组损伤程度有所好转。通过Suzuki评分对HIRI组织病理学量化分析结果显示再灌注12h后损伤最为明显。 2.生信结果显示CCL20在HIRI中相较于sham组有显著性表达差异。WB结果显示CCL20在IR-12h组中表达明显上升。qRT-PCR支持了这一结论。ELISA测量血清CCL20浓度，对比sham组和IR-12h组有统计学意义的升高。 3.qRT-PCR显示CCL20在AAV-CCL20-RNAi组被显著抑制，GFP同时在AAV-CCL20-NC组和AAV-CCL20-RNAi组高表达，这证明了CCL20在小鼠HIRI模型中被成功敲低。与AAV-CCL20-NC组相比，血清转氨酶ALT和AST的表达在AAV-CCL20-RNAi组出现下降。HE染色显示，AAV-CCL20-RNAi组的组织坏死区域相对更小，炎症细胞浸润表现也更少。检测小鼠肝脏炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α的转录水平，与AAV-CCL20-NC组相比，AAV-CCL20-RNAi组有显著降低。这些结果表明CCL20的降低改善了HIRI，提升其在该病理过程中可能发挥促炎作用。WB结果显示p38蛋白的磷酸化水平的降低，而Erk蛋白的磷酸化水平并没有发生显著改变，提示CCL20可能通过促进p38蛋白相关通路介导的炎症信号的激活而促进损伤。 【结论】 1.本研究成功建立小鼠肝缺血再灌注损伤模型； 2.HIRI后CCL20的表达明显上升； 3.抑制CCL20的表达可以减轻HIRI损伤，并可能通过促进p38蛋白的磷酸化介导炎症信号通路的激活来加重缺血再灌注损伤。
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