摘要
目的:通过生物信息学及体外实验分析YKT6在LUAD中表达及临床意义，探究可能参与的通路及其在LUAD中发挥的作用。 方法:SMART,ESPript,Uniprot,ClustalOmega数据库探究YKT6在物种间的保守性。UALCAN、TCGA、HPA数据库分析YKT6在LUAD与正常组织的表达差异，探究其表达与临床特征及预后相关性。CBioPortal网站探究YKT6相关基因，基于STRING数据库绘制PPI网络并筛选出关键基因(Hubgenes)，分析hub基因在LUAD中的表达及预后价值，并进行GO、KEGG富集分析和GSEA分析。TCGA及TIMER数据库进行免疫浸润分析。QRT-PCR探究YKT6mRNA在LUAD中的表达;IHC及TMA探究YKT6蛋白在LUAD中的表达。此外，本研究选择A549、Calu-1细胞系，使用siRNA进行敲降，qRT-PCR验证敲降水平及对Twist1,MMP9,Ki67,Snail,TGT-β，Hes1及Slug等增殖和EMT标志物的作用。CCK8、Transwell、划痕实验以及流式细胞术探究YKT6对LUAD细胞增殖、侵袭、迁移以及凋亡的影响。 结果:YKT6蛋白氨基酸序列在各物种之间高度保守。YKT6在LUAD中高表达，其表达与临床特征(分期、吸烟史、淋巴结转移、TP53突变)及预后不良相关。通过建立PPI网络，我们筛选出了相关性最强的前十位hub基因:PLK1、CDCA5、CDC20、KIF23、TPX2、KIF2C、FEN1、CDC6、CDC45、CDCA8;hub基因在LUAD中均高表达，且表达与LUAD不良预后显著相关。GO和KEGG分析表明，YKT6主要参与细胞分裂、DNA修复、有丝分裂、细胞周期、P53等通路;GSEA分析结果显示，YKT6主要通过DNA复制、DNA链延长、PLK1、ATR等通路发挥作用。免疫浸润分析显示YKT6表达与免疫细胞浸润水平有关。QRT-PCR显示YKT6在LUAD组织中显著高表达;免疫组化及组织芯片结果与上述一致。使用siRNA敲降YKT6表达，qRT-PCR验证敲降水平，结果显示，YKT6在A549和Calu-1细胞中表达水平降低，且敲降YKT6表达可抑制Twist1,MMP9,Ki67,Snail,TGT-β,Hes1及Slug等指标的表达;CCK-8、Transwell、划痕实验以及流式细胞术等表明，敲降YKT6可抑制LUAD增殖、侵袭与迁移，促进凋亡。 结论:YKT6在LUAD中高表达，且表达与LUAD不良预后相关。敲降YKT6能够抑制LUAD的增殖、侵袭、迁移，促进细胞凋亡。
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