摘要
目的： 本研究拟明确参芪降糖颗粒免疫调节药效物质基础及探讨其作用机制。 方法： 1、利用 UPLC-Q/TOF-MS 技术，鉴定参芪降糖颗粒单味药材及复方中化学成分，并通过灌胃给予参芪降糖颗粒后正常大鼠的血清鉴定其中原型成分及代谢成分； 2、采用腹腔注射环磷酰胺诱导免疫低下大鼠模型，通过测定大鼠血清中免疫活性物质及胸腺、脾脏组织病理学变化，评价参芪降糖颗粒发挥免疫调节的药效作用； 3、以鉴定出来的参芪降糖颗粒化学成分作为成分库，通过网络药理学技术预测参芪降糖颗粒免疫调节的潜在活性成分和作用靶点，通过 GO 富集分析及 KEGG 通路富集分析预测相关的信号通路，初步探讨参芪降糖颗粒免疫调节作用机制； 4、基于UPLC-Q/TOF-MS技术构建对照组、模型组、参芪降糖颗粒高剂量组大鼠血浆代谢物轮廓谱，采用 PCA和 PLS-DA分析表征各组大鼠血浆代谢物轮廓谱的差异；根据 VIP＞1 及 P＜0.05筛选出参芪降糖颗粒免疫调节生物标志物；通过生物网络分析结果初步阐释参芪降糖颗粒免疫调节作用机制。 结果： 1、通过 UPLC-Q/TOF-MS 技术共鉴定出参芪降糖颗粒化学成分145种，其中皂苷类化合物20种，黄酮类化合物27种，苯丙素类化合物 31 种，三萜类化合物 30 种，有机酸及酚酸类化合物 25种，其他类型成分12种；大鼠血清中鉴定出了参芪降糖颗粒51种入血成分，包括30种原型成分和21种代谢产物； 2、药效研究结果表明，参芪降糖颗粒可有效改善环磷酰胺诱导的免疫器官损伤、血清中免疫球蛋白及细胞因子等水平变化，说明参芪降糖颗粒对多项免疫功能均有较显著的改善及增强作用； 3、经网络药理学研究发现，参芪降糖颗粒中人参皂苷Rg1、Re、Rd、五味子乙素、五味子醇乙、汉黄芩素等多个成分，作用于SRC、STAT3、HSP90AA1、MAPK1、MAPK3等多个靶点，通过调节PI3K-Akt、脂质和动脉粥样硬化、MAPK 等通路上的信号传导，减少炎症因子释放，抑制细胞增殖凋亡，达到免疫调节作用； 4、血浆非靶向代谢组研究发现，通过PCA和PLS-DA分析筛选出参芪降糖颗粒逆转了环磷酰胺诱导的免疫低下大鼠中 L-组氨酸、L-丙氨酸、鞘氨醇等31种关键代谢物水平，通过调控氨基酸代谢、鞘脂类代谢、嘌呤代谢、甘油磷脂代谢等通路发挥免疫调节作用。生物网络分析表明，参芪降糖颗粒主要通过亚油酸代谢、花生四烯酸代谢、甘油磷脂代谢等代谢途径，VEGF 信号通路、Ras 信号通路，减轻炎症反应、抑制细胞恶性转化及细胞增殖凋亡。 结论： 本研究共鉴定出参芪降糖颗粒中化学成分145种，其中人参皂苷类成分、黄酮类成分主要以原型或代谢形式存在血清中发挥药效作用；参芪降糖颗粒对环磷酰胺诱导大鼠免疫低下具有良好的调节作用；参芪降糖颗粒可通过抑制MAPK和PLA2的活性减少炎症通路及脂质代谢通路介导的炎症因子释放，从而减轻炎症反应；通过调控VEGF、Ras信号通路抑制细胞恶性转化及细胞增殖凋亡。
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