摘要
目的:中药复方组分复杂靶点众多，本研究通过联合转录组学和网络药理学方法探究补阳还五汤(BuyangHuanwuDecoction,BYHWD)治疗脑出血(intracerebralhemorrhage,ICH)后神经损伤的调控机制。 方法:1.将C57BL/6小鼠随机分为假手术组(Sham)、脑出血组(ICH)和补阳还五汤组(BYHWD)，通过自体血注射建立ICH模型，小鼠连续给予等量蒸馏水或者补阳还五汤灌胃7天，改良神经功能评分、错足实验评价神经功能缺损情况，苏木素-伊红染色显示脑组织病理学变化、尼氏染色评估神经元损伤、IgG免疫组化染色检测药物对血脑屏障通透性的影响。2.网络药理学数据库预测BYHWD治疗ICH潜在靶点，收集动物脑组织进行转录组学检测，分析差异表达mRNA。进行GO富集分析和KEGG信号通路分析以诠释靶点基因功能;联合转录组学和网络药理学结果筛选发挥治疗作用的关键靶标。3.运用免疫荧光染色，实时定量荧光PCR，蛋白质印迹和透射电子显微镜等方法探究作用机制。 结果:1.BYHWD可改善ICH后神经功能缺损。2.网络药理学分析获得203个潜在治疗靶点;转录组学检测发现109个差异表达mRNA。3.通过转录组学联合网络药理学研究方法筛选得到5个核心作用靶标:组织蛋白酶B(Ctsb)、P-糖蛋白(Abcb1b)、toll样受体-4(Tlr4)、CC类趋化因子配体2(Ccl12)和凋亡抑制重复序列蛋白5(Birc5)。4.生物信息学分析发现自噬、神经细胞凋亡和PI3K-Akt、mTOR、AMPK信号通路等可能参与调控BYHWD治疗ICH的过程。5.BYHWD干预ICH后，Ctsb的表达水平降低，自噬水平升高。 结论:1.BYHWD可能通过调控自噬、神经细胞凋亡以及PI3K-Akt、mTOR信号通路等减轻ICH模型小鼠的神经损伤。2.Abcb1b、Ccl12、Birc5、Tlr4和Ctsb可能为BYHWD治疗ICH的潜在靶点。
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