摘要
目的： 优化牛胆汁发酵天南星的炮制工艺，在此基础上从药性、燥性和药效三方面系统评价胆汁炮制天南星前后的变化。 方法： 1 建立牛胆汁中甘氨胆酸的 HPLC 含量测定方法和胆酸与甘氨胆酸的 TLC鉴别方法。通过检测 50批新鲜牛胆汁中pH 值、总密度、固形物含量和甘氨胆酸含量，建立牛胆汁质量评价体系。同时对其保存条件及冻融条件进行考察。 2建立胆南星中夏佛塔苷、异夏佛塔苷的含量测定方法，以夏佛塔苷、异夏佛塔苷和甘氨胆酸转化率为考察指标，以发酵天数、发酵温度、发酵湿度、胆汁用量为考察对象，优化胆南星的炮制工艺。 3 建立大鼠冰水刺激-左甲状腺素钠诱导的“寒-热”模型，考察牛胆汁炮制天南星前后对“寒-热”模型大鼠①进食量、饮水量、肛温、体重以及耳缘静脉充血；②结肠病理变化情况；③血清中神经系统和内分泌系统与体温调节的相关因子以及大鼠肝脏中丙酮酸、ATP 酶活力等能量代谢相关因子；④海马、下丘脑、背根神经节中TRPV1和TRPM8表达的影响。 4 考察牛胆汁炮制天南星前后对正常大鼠①饮水量、排尿量、大便含水量；②结肠、肾脏、颌下腺病理变化情况；③免疫组化法检测颌下腺、肾脏、结肠中水通道蛋白的表达情况；④全血、血浆粘度和血清中环磷腺苷/环磷酸鸟苷和三磷酸腺苷酶含量；⑤“毒针晶”的结构变化和对家兔眼刺激的影响。 5建立高温水浴诱导热性惊厥大鼠模型，考察牛胆汁炮制天南星前后对①惊厥持续时间、惊厥率、惊厥潜伏期和惊厥级别；②海马组织病理变化；③海马组织中GABAAR和GRIA1（GluA1）蛋白表达；④肠道菌群变化；⑤脑内TNF-α， IL-1β，IL-6和HMGB1表达的影响。 结果： 1牛胆汁呈弱酸性（pH在6.20～7.25），密度约为0.9762 g/mL，总固体物含量约为0.5383 g/mL，牛胆汁可在-20℃～-80℃中保存6个月内质量稳定，复融方法为室温或37℃水浴。 2牛胆汁发酵天南星工艺最优参数为温度35℃、湿度75%、牛胆汁用量300%、发酵时间为7天。 3天南星可升高寒证大鼠血清中NE、T4、DA等含量和肝脏中丙酮酸（PA）、Na+-K+/ATP酶、Ca2+-Mg2+/ATP酶含量，降低5-HT含量，改善寒证结肠损伤，下调海马、下丘脑、背根神经节中TRPM8的表达，胆南星对相应指标的影响则表现与天南星相反，可改善热证大鼠结肠损伤，下调海马、下丘脑、背根神经节中TRPV1的表达。 4牛胆汁炮制天南星前后水煎液对小鼠灌胃无毒性，天南星的小鼠最大耐受量为108 g/kg，胆南星对小鼠最大耐受量为75.6 g/kg，胆汁炮制天南星后刺激性和燥性显著降低（Plt;0.05）。 5胆南星高剂量组惊厥时间缩短，潜伏期延长（Plt;0.05）；海马组织损伤减弱，GABAAR 蛋白表达显著升高（P lt; 0.05），GRIA1 蛋白表达显著降低（P lt;0.05），TNF-α，IL-1β，IL-6和HMGB1在脑和血清中含量减少（Plt;0.05）。16SrRNA测序分析发现，模型大鼠肠道菌群发生明显改变，胆南星、天南星干预后显著调节了肠道菌群的丰富度和多样性（Plt;0.05）。物种组成分析结果显示，胆南星可显著提高热性惊厥大鼠肠道乳酸杆菌（Lactobacillus）等益生菌丰富度，减少拟杆菌（Bacteroidales）等致病菌的丰富度。 结论： 牛胆汁可在-20℃～-80℃中保存6个月，优化的胆南星炮制工艺合理可行，可为其工业生产提供参数。牛胆汁炮制天南星后，药性由热转凉；刺激性和燥性效应减弱；胆南星抗热性惊厥药效作用优于天南星，可能与干预肠道菌群介导GABA等抑制惊厥的神经递质的代谢物和大脑中炎症因子的表达有关。
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