摘要
目的：本实验旨探讨观察金果胃康胶囊对于胃癌前病变细胞增殖的抑制作用，以及对于Wnt/Lgr5信号通路基因、蛋白的影响，从分子角度研究金果胃康胶囊干预胃癌前病变的可能作用机制。 方法：利用人胃黏膜上皮细胞（GES-1）经MMNG诱导制备胃癌前病变细胞（MC）模型；同时制备生理盐水、维酶素、金果胃康胶囊高、中、低剂量含药血清；实验分为5组生理盐水组、维酶素组、金果胃康胶囊高剂量组、中剂量组和低剂量组；显微镜下观察GES-1细胞与MC细胞的形态对比；采用RT-qPCR检测各组细胞Lgr5、C-myc基因表达水平；采用WB检测各组细胞Wnt1、Wnt3a、β-catenin、C-myc、MMP-7蛋白的表达水平，并对各组之间的差异进行比较。 结果：（1）GES-1细胞与MC细胞形态对比。镜下观察可见人胃黏膜上皮细胞形状规整、梭形、排列有序、细胞生长散在，在加入MNNG诱导形成MC细胞后可见细胞形状不规整，多呈三边形，多角形，细胞出现大面积的死亡，残余的细胞形态不清，丧失了生长极性，细胞排列杂乱无序，可见残余细胞的堆叠，与瓶壁贴合不紧密出现脱离瓶身的现象。 （2）采用RT-qPCR检测Lgr5基因表达。结果显示，经维酶素组治疗的MC细胞Lgr5的表达水平较生理盐水组明显降低；与维酶素组相比低剂量金果胃康胶囊组MC细胞的Lgr5表达略有下降；相比于维酶素组，中剂量和高剂量金果胃康胶囊组MC细胞的Lgr5表达显著降低；中剂量金果胃康胶囊组较低剂量金果胃康胶囊组Lgr5表达稍有下降，高剂量金果胃康胶囊组较低剂量、中剂量金果胃康胶囊组MC细胞的Lgr5表达明显下降。 （3）采用RT-qPCR检测C-myc基因表达。结果显示，与生理盐水组相比，维酶素组MC细胞C-myc表达明显降低；低剂量金果胃康胶囊组MC细胞的C-myc表达较维酶素组稍有降低；中剂量和高剂量金果胃康胶囊组MC细胞的C-myc表达较维酶素组明显降低，中剂量金果胃康组较低剂量金果胃康组的C-myc表达下降较明显，高剂量金果胃康胶囊组较低剂量、中剂量金果胃康胶囊组MC细胞的C-myc表达显著下降。 （4）采用WB检测Wnt1蛋白表达水平。结果显示，维酶素组Wnt1蛋白表达较生理盐水组表达水平明显降低（P＜0.05）；与维酶素组相比低剂量金果胃康胶囊组MC细胞的Wnt1蛋白表达略有下降，无统计学差异(P＞0.05)；与维酶素组相比，中剂量和高剂量金果胃康胶囊组的Wnt1蛋白表达显著降低(P＜0.05)；中剂量较低剂量金果胃康胶囊组的Wnt1蛋白表达降低(P＜0.05)；高剂量金果胃康胶囊组较低剂量、中剂量金果胃康胶囊组的Wnt1蛋白表达显著下降（P＜0.05）。 （5）采用WB检测Wnt3a蛋白表达水平。结果显示，维酶素组Wnt3a蛋白表达较生理盐水组表达水平明显降低（P＜0.05）；与维酶素组相比低剂量金果胃康胶囊组的Wnt3a蛋白表达水平稍有下降，无统计学差异(P＞0.05)；相比于维酶素组，中剂量和高剂量金果胃康胶囊组的Wnt3a蛋白表达显著降低(P＜0.05)；中剂量较低剂量金果胃康胶囊组的Wnt3a蛋白表达水平明显降低(P＜0.05)；高剂量金果胃康胶囊组较低剂量、中剂量金果胃康胶囊组的Wnt3a蛋白表达显著下降（P＜0.05）。 （6）采用WB检测β-catenin蛋白表达水平。结果显示，维酶素组β-catenin蛋白较生理盐水组表达水平明显降低（P＜0.05）；与维酶素组相比低剂量金果胃康胶囊组的β-catenin蛋白表达水平极其显著下降(P＜0.05)；中剂量和高剂量金果胃康胶囊组比维酶素组的β-catenin蛋白表达，极明显降低(P＜0.05)；中剂量较低剂量金果胃康胶囊组的β-catenin蛋白表达水平明显降低(P＜0.05)；高剂量金果胃康胶囊组较低剂量、中剂量金果胃康胶囊组的β-catenin蛋白表达显著下降（P＜0.05）。 （7）采用WB检测C-myc蛋白表达水平。结果表明，维酶素组的C-myc蛋白表达较生理盐水组表达水平明显降低（P＜0.05）；与维酶素组相比低剂量金果胃康胶囊组的C-myc蛋白表达稍有下降，无统计学差异(P＞0.05)；相比于维酶素组，中剂量和高剂量金果胃康胶囊组的C-myc蛋白表达显著降低(P＜0.05)；中剂量较低剂量金果胃康胶囊组的C-myc蛋白表达水平较明显降低(P＜0.05)；高剂量金果胃康胶囊组MC细胞较低剂量、中剂量金果胃康胶囊组的C-myc蛋白表达显著下降（P＜0.05）。（8）采用WB检测MMP-7蛋白表达水平。结果表明，维酶素组MC细胞MMP-7蛋白较生理盐水组表达水平明显降低（P＜0.05）；与维酶素组相比低剂量金果胃康胶囊组的MMP-7蛋白表达略有下降，无统计学差异(P＞0.05)；相比于维酶素组，中剂量和高剂量金果胃康胶囊组的MMP-7蛋白表达显著降低(P＜0.05)；中剂量较低剂量金果胃康胶囊组的MMP-7蛋白表达水平降低(P＜0.05)；高剂量金果胃康胶囊组MC细胞较低剂量、中剂量金果胃康胶囊组MC细胞的MMP-7蛋白表达显著下降（P＜0.05）。 结论：（1）本实验通过对GES-1细胞MNNG诱导造模成功复制了胃癌前病变细胞的模型，金果胃康胶囊能抑制MC细胞的增殖，以及在一定程度上逆转MC细胞。 （2）金果胃康胶囊能够调控Wnt/Lgr5信号通路使得MC细胞的Lgr5、C-myc基因和Wnt1、Wnt3a、β-catenin、C-myc、MMP-7蛋白的表达下调，起到干预或逆转MC细胞的病变进程的作用，这可能是金果胃康胶囊干预胃癌前病变的重要作用机制之一。
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