摘要
沙门菌（Salmonella）是一种革兰氏阴性、兼性胞内寄生菌，引起人和多种动物食源性疾病；SseB是一种分泌蛋白，被认为是沙门菌保护性抗原之一。本研究通过减毒鼠伤寒沙门菌将保护性抗原SseB表达在胞外、细胞膜上及胞内，在小鼠模型上比较了三个重组株免疫对鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌的免疫保护效应，筛选出存在交叉免疫保护的疫苗株。 1 鼠伤寒沙门菌重组株的构建 利用无缝克隆的方法构建表达鼠伤寒沙门菌分泌蛋白SseB于胞外、细胞膜以及胞内的质粒（Sec/Sur/Cyto-SseB-pBGc），并将三个质粒转入减毒鼠伤寒沙门菌（ΔaroA），获得三株鼠伤寒沙门菌重组株（Sec/Sur/Cyto-SseB-ΔaroA）。通过免疫印迹试验在Sec-SseB-ΔaroA培养上清中检测到目的蛋白，在Sur-SseB-ΔaroA的细胞裂解液和细胞膜组分中均检测到目的蛋白，在Cyto-SseB-ΔaroA的细胞裂解液样品中检测到目的蛋白，以上结果说明成功构建三个将SseB表达在胞外、细胞膜和胞内的重组株。 2 鼠伤寒沙门菌重组株生物学特性研究 生物学特性结果显示，三个重组鼠伤寒沙门菌的生长速率与亲本株（ΔaroA）相似，重组质粒在载体菌株中能够稳定保存及表达，毒力和定殖试验表明三个减毒重组株毒力和定殖能力均与亲本株相似，与野生株相比显著降低。以上结果表明三个重组鼠伤寒沙门菌具有较高的安全性，重组质粒稳定性较强，且表达SseB对菌株本身的生长无明显影响。 3 疫苗株的免疫原性及交叉保护力评价 三个重组鼠伤寒沙门菌在BALB/c小鼠模型上进行初次免疫和加强免疫，ELISA结果显示，在第一次免疫后第35日，三个重组株免疫组均产生了高水平的针对鼠伤寒沙门菌全菌抗原的血清 IgG反应；在鼠伤寒沙门菌攻毒后，三个重组株免疫组小鼠组织器官中的细菌载量均显著降低，提供100%的同源保护率。在肠炎沙门菌攻毒后，膜上表达和胞内表达SseB的重组株免疫后无法降低肠炎沙门菌在组织器官中的定殖水平，且无法保护小鼠抵抗致命感染；而分泌表达SseB的重组株免疫后显著降低肠炎沙门菌在组织器官中的定殖水平，产生针对肠炎沙门菌37.5%的保护率。以上结果表明，Sec-SseBΔaroA疫苗株能够预防鼠伤寒沙门菌，在一定程度上预防肠炎沙门菌。
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