摘要
性别决定机制一直是生命科学研究的热点。贝类是海洋生物第一大门类，物种丰富、生境多样，性别决定机制复杂但研究发展滞后。皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai Ino）是我国重要的海水养殖贝类，西氏鲍（H. sieboldii Reeve）是其近缘种。本研究以其为研究对象，通过全基因组关联分析和性别二态 SNPs 分布识别它们的性染色体，并开发了性别分子标记。主要研究结果如下： （1） 结合全基因组关联分析和性别二态 SNPs 的分布分析两种方法，通过定位皱纹盘鲍和西氏鲍的性别连锁区段（sex-linked genomic segment，SLS）识别了它们的性染色体。其中，皱纹盘鲍的SLS有2个区段，分别位于Chr. 9（约2.59 Mb）和Chr. 2（约50.02 Kb）。西氏鲍的SLS也有2个区段，分别位于Chr. 4（约23.20 Mb）和Chr. 5（约4.95 Mb）。染色体共线性分析结果显示，皱纹盘鲍的Chr. 2和Chr. 9与西氏鲍的Chr. 4和Chr. 5不是同源染色体。此外，在皱纹盘鲍中注释到含有性别二态SNP/InDel的基因28个，在西氏鲍中注释到189个基因，但交集仅有1个—— xynB基因（参与木聚糖降解）。 （2） 利用性别二态InDel和SNP开发了皱纹盘鲍与西氏鲍的性别分子标记。在皱纹盘鲍中，基于Chr. 9上的2个性别二态InDel开发了两个共显性标记（MSP-2和MSP-7），同时基于Chr. 2上连续的3个性别二态SNP开发了一个显性标记（2MSP-FX1）。验证结果显示，MSP-2和2MSP-FX1的雌雄性别检出率均为100%。在西氏鲍中，基于Chr. 4上的InDel 和 SNP，共设计 7 对引物，其中 3 对引物在验证实验中雌雄的符合率均在 95% 以上，但未找到与性别完全连锁的分子标记。利用皱纹盘鲍MSP-2与西氏鲍X14-FR性别分子标记检查杂交种--西盘鲍的雌雄个体。结果显示，皱纹盘鲍的性别分子标记可以适用于西盘鲍，但西氏鲍的性别分子标记不适用。 （3） 利用BAC-FISH识别了皱纹盘鲍的性染色体。利用生物信息学的方法将皱纹盘鲍 2411 条 BAC 末端序列比对上皱纹盘鲍的参考基因组，其中定位于皱纹盘鲍 Chr. 2 的BAC克隆共3个，定位于Chr. 9的BAC克隆共6个。根据比对和BAC区间重复序列含量统计的结果，选择克隆31-K11和37-A13进行双色BAC-FISH识别了Chr. 2和Chr. 9。 以上结果显示，皱纹盘鲍与西氏鲍都具有两对性染色体，但性染色体和性别决定系统可能发生了种间转换，而且两种鲍的重组抑制区范围和分化程度也存在差异。本论文的研究结果为进一步研究皱纹盘鲍和西氏鲍的性别决定分子机制奠定了基础。
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