摘要
骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤，复发和转移患者的预后不佳。为了改善患者预后，寻找新的潜在治疗靶点仍是目前骨肉瘤研究的热点之一。SPAG4作为癌睾抗原蛋白家族的一员，已被证实能在肿瘤的发生发展中发挥作用，但其在骨肉瘤中的功能和机制尚不明确。 目的:通过探索SPAG4在骨肉瘤中的功能和机制，为骨肉瘤寻找新的潜在治疗靶点。 方法:（1）通过Western blot实验和生物信息学技术检测SPAG4在骨肉瘤中的蛋白和mRNA表达水平。（2）选取HOS和U2OS细胞系，通过慢病毒转染构建SPAG4稳定过表达和敲低的细胞模型。（3）通过CCK8、EdU、IC50值测定和克隆形成实验检测SPAG4对骨肉瘤细胞增殖能力和多柔比星耐药性获得的影响。（4）通过伤口愈合实验和Transwell实验检测SPAG4对骨肉瘤细胞转移能力的影响。（5）通过裸鼠皮下荷瘤实验检测SPAG4在体内对骨肉瘤细胞成瘤能力的影响。（6）通过转录组测序，KEGG通路富集和GO功能分析探索SPAG4在骨肉瘤中的机制和功能。（7）通过Western blot实验检测SPAG4在骨肉瘤中与PI3K/Akt信号通路及自噬的关系。 结果:（1）SPAG4在骨肉瘤中的蛋白和mRNA表达水平均高表达。（2）SPAG4过表达在体外促进HOS和U2OS细胞的增殖，转移和多柔比星耐药性获得。（3）SPAG4敲低在体外抑制HOS和U2OS细胞的增殖和转移。（4）SPAG4过表达在体内促进骨肉瘤细胞成瘤,敲低则抑制。（5）KEGG通路富集分析表明SPAG4与MAPKd、Rap1、Ras和PI3K/Akt等经典肿瘤信号通路有关。（6）GO功能分析表明SPAG4与刺激反应的调节，细胞发育和细胞分化等过程有关。（7）Western blot 实验表明 SPAG4 激活 HOS 和 U2OS 中的 PI3K/Akt信号通路，抑制HOS和U2OS细胞中的自噬反应。 结论:（1）SPAG4是骨肉瘤的一个促癌基因，可能是骨肉瘤潜在的治疗靶点。（2）SPAG4高表达激活PI3K/Akt信号通路和抑制细胞自噬反应可能是骨肉瘤潜在的发病机制之一。
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