摘要
无论是人类还是动植物，疾病都是其生命的主要威胁。临床治疗上，细菌或真菌感染对患者的健康造成危害。作为农业大国，微生物感染也给农业生产带来了巨大的经济损失。随着抗菌药物在临床治疗、农业上的广泛应用，各类病原菌的耐药性日益增强。因此，需要新的药源分子来应对这些病原菌。海洋真菌是药物开发利用的新兴资源宝库，具有易培养、代谢产物丰富和生物活性多样等优点，对其进行次级代谢产物的研究，将有助于新型抗生素的研发。 本论文主要聚焦于海洋来源共附生真菌次级代谢产物的抗菌活性及其化学结构，以抗人类和植物病原菌为活性导向，进行菌株的筛选及次级代谢产物的分离鉴定，以期发现抗菌活性良好的先导化合物。对采自南海西北次海盆的海星进行共附生真菌的分离纯化，获得共附生真菌27株。通过小量发酵以及抗菌活性初筛，从中挑选两株抗菌活性较强的菌株WXF1904和WXF1901作为目标菌株。通过形态学和分子生物学等方法对目标菌株进行鉴定，两株目标菌株均被鉴定为属于曲霉属（Aspergillus）并分别命名为Aspergillus sp.WXF1904和Aspergillus sp.WXF1901。 用固体静置培养法，将目标菌株进行放大发酵。发酵培养物经乙酸乙酯浸提和浓缩，获得粗提物。将粗提物溶解于95%甲醇，并用石油醚萃取。将石油醚部位和甲醇部位分别进行浓缩回收。通过各种色谱柱层析方法对甲醇部位的粗浸膏进行分离纯化。综合运用各种色谱学、波谱学和光谱学等手段，并结合文献报道数据对比，鉴定化合物的化学结构。 从菌株Aspergillus sp.WXF1904的甲醇部位粗浸膏中，分离并鉴定了14个化合物的化学结构。其中包括1个含卤素的新异香豆素6-chloro-5,7-dihydroxy-3,8-dimethylisocoumarin（L-F-11），3个新的苯醚类化合物（L-F-18，L-F-121，L-F-122），10个已知化合物，分别为ungulnol（L-F4-7），emeguisin B（L-F-19），nidulin（L-F-14），aspersidone（L-F-20），pilobolusate（L-F-12），pyrocatechol（L-F3-18），vanillic acid（L-F4-4），对羟基苯甲醛（L-F3-13），methyl orsellinate（L-F4-6），wasabidienone E（L-F-6）。抗菌活性检测结果表明，新的苯醚L-F-18和L-F-122对8种植物致病真菌均具有抑制作用。其中，化合物L-F-18和L-F-122对薯蓣炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides HNM1003）的最低抑制浓度为6.25和15.6μg/m L。已知化合物L-F-14对人类致病细菌金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）ATCC29213的最低抑制浓度为6.3μg/mL。此外，还检测了化合物对乙酰胆碱酯酶和胰脂肪酶的抑制活性。结果表明，已知化合物L-F-14、L-F-19具有较好的乙酰胆碱酯酶抑制活性，抑制率分别为99.1%、88.8%，新的异香豆素L-F-11和已知化合物L-F-12具有较弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性，抑制率分别为19.9%、15.6%。化合物L-F-14对胰脂肪酶的抑制率为76.1%。 从菌株Aspergillus sp.WXF1901的甲醇部位粗浸膏中，分离纯化并鉴定了10个化合物，分别为2-（3,5-heptadienyl）-3,6-dihydroxy-5-（3-methyl-2-butenyl）benzaldehyde（NE-P3-2），tetrahydroauroglaucin（NE-P5），flavoglaucin（NE-P6），echinulin（NE-P2），questinol（NE-7-G1），phytochemistry（NE-3-1），isotorachrysone（NE-4-3），physcion（NE-3-2），2-acetyl-3,5-dihydroxybenzoic acid（NE-5-2），2-acetyl-3-hydroxy-5-methoxybenzoic acid（NE-5-5）。抗菌活性检测结果表明，化合物NE-P3-2对粪链球菌（Enterococcus faecalis）ATCC29212具有微弱的抑制作用。 本论文从海星中筛选出两株具有抗菌活性的曲霉属真菌。从中分离鉴定了24个化合物，其中包含三个新的苯醚类化合物和一个新的异香豆素。对所有化合物进行了抗菌活性筛选，其中两个新的苯醚类化合物具有抗植物病原真菌活性。部分化合物具有胰脂肪酶和乙酰胆碱酯酶抑制活性。
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