摘要
目的:记忆性CD8+T细胞作为机体免疫系统中重要的效应细胞，再次遇到特异性抗原时，能快速识别并清除病原微生物或肿瘤细胞，因而在机体免疫防御中扮演了重要角色。组织驻留记忆性CD8+T细胞(Tissue-resident memory CD8+T cells,TRMs)作为一种特殊类型的记忆性CD8+T细胞，主要位于与环境交界的黏膜等屏障组织内，其分化形成和功能维持受多种因素的影响，其潜在的调节机制尚不明确。内源性逆转录病毒(Endogenous retroviruses,ERVs)是人类祖先在进化过程中融入种系DNA的古代外源性逆转录病毒的遗迹，作为抗病毒和抗肿瘤免疫的调节元件受到研究者越来越多的关注。研究表明ERVs与固有免疫存在密切关联，但其与适应性免疫应答的相关报道甚少，与CD8+T细胞是否存在关联仍不明确。本研究中，我们旨在探究ERVs在记忆性CD8+T细胞亚群中的特征，以期为抗病毒及抗肿瘤的潜在免疫治疗靶点提供新思路。 方法:本研究首先在淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(Lymphocytic choriomeningitis mammarenavirus,LCMV)-clone-13 慢性感染小鼠模型中过继转移LCMV DbGP33-41-specific P14 CD8+T细胞。在过继转移的第25天，从肠道上皮层中分离出以CD45.1和CD45.2标记鉴定的P14细胞，并进一步将其分为4个亚群。其次，为了研究ERVs在记忆性CD8+T细胞亚群中的分布特征，我们测定了转座元件(Transosable elements,TEs)在 na?ve CD8+T 细胞、中央记忆性 T 细胞(Central memory T cells,TCMs)、效应记忆性 T 细胞(Effector memory T cells,TEMs)和TRMs中的表达百分比。通过RNA测序结果，我们根据ERVs在CD8+T细胞亚群激活和分化过程中的不同特点将其分为6类。进一步，从不同器官TRMs网络数据文件中进一步分析差异ERVs,测定ERVs在不同器官中的占比。最后，我们还分析了不同器官TRMs中有交集的ERVs。 结果:基于LCMV-clone-13慢性感染小鼠模型，通过对记忆性CD8+T细胞亚群的测序分析发现，不同记忆性CD8+T细胞亚群中长末端重复序列(Long terminal repeat,LTR)、长散在核重复序列和短散在核重复序列等TEs的比例不同。进一步发现共有42个ERVs随着na?ve CD8+T细胞激活分化以6种差异表达模式而改变。第一类改变:14 个 ERVs(LTR:ERV1:MER92,LTR:ERV1:RLTR48C,LTR:ERVK:ERVB3_1-I_MM-int,LTR:ERVK:ERVB4_1B-I_MM-int,LTR:ERVL-MaLR:MLT1G,LTR:ERVK:RLTR19-int,LTR:ERVK:RLTR26C_MM,LTR:ERVK:RLTR3_Mm,LTR:Gyspy:MamGypLTR2c,LTR:ERVK:RLTR9C,LTR:ERVK:IAPLTR4_I,LTR:ERVK:RLTR9A2,LTR:ERVK:MMTV-int,LTR:ERVK:RLTR11D)在 na?ve CD8+T 细胞被诱导分化成TCMs和TEMs过程中经历一个相对低的平台期表达，而在TRMs分化阶段显著升高。第二类改变:na?ve CD8+T细胞先激活分化成TEMs，5个 ERVs(LTR:ERV1:LTRIS3,LTR:ERV1:RLTR24,LTR:ERVK:RLTR45,LTR:ERVK:RMER16_Mm,LTR:ERVK:RMER20B)表达量非线性增加，而在TEMs分化成TCMs的过程中逐渐表达下调。第三类改变:na?ve T 细胞激活后，7 个 ERVs(LTR:ERV1:LTRIS5,LTR:ERVK:MLTR31D_MM,LTR:ERVK:RLTR50B,LTR:ERVL:HERV16-int,LTR:ERVL:LTR16E1,LTR:Gypsy:LTR88c,LTR:ERVL:LTR82B)表达量亦非线性地增加，但在TEMs分化成TCMs的过程中表达无显著下降或增高。第四类改变:在na?ve T细胞分化为TCMs及TEMs的过程中，7 种 ERVs(LTR:ERV1:MER50B,LTR:ERVK:MMETn-int,LTR:ERVK:RLTR45-int,LTR:ERVL:MER76,LTR:ERVK:RLTRETN_Mm,LTR:Gypsy:MamGypLTR3,LTR:Gyspy:LTR88a)的表达量分别呈现出略微增加、不变或略微下降的趋势，但是在TRMs分化过程中均呈显著下降的趋势。第五类改变:7种ERVs(LTR:ERVK:IAPEY5_I-int,LTR:ERV1:MER92A,LTR:ERV1:MER92-int,LTR:ERVK:BGLⅡ,LTR:ERVK:RMER3D-int,LTR:ERVL:ERV3-16A3_I-int,LTR:ERVL:LTR84a)的表达在TEMs分化过程中均有显著增加的趋势，而在TRMs分化过程中有显著降低的趋势。第六类改变:两种ERVs(LTR:ERVK:IAPLTR2b,LTR:ERVK:RLTR13D5)在TEMs分化过程中的表达显著降低，而在进一步分化到TCMs的过程中表达量升高，但从TCMs到TRMs的过程中这两种ERVs表达量显著降低到了最小值。最后，在不同器官中检测ERVs发现，不同器官中ERVs的占比不同，并且其中4种ERVs(LTR:ERVK:MMTV-int;LTR:ERV1:MER50B;LTR:ERVK:RLTR3_Mm,LTR:ERV1:MER92A)在肠道、肝脏和皮肤中TRMs存在共同表达。 结论:本研究绘制了 ERVs在不同记忆性CD8+T细胞亚群中的差异分布特征。该结果提示差异表达的ERVs可能在调控CD8+T细胞活化、不同记忆性CD8+T细胞亚群包括TRMs的形成过程中发挥作用，从而为今后基于ERVs调控CD8+T细胞抗病毒和抗肿瘤免疫应答提供新思路。但仍需进一步研究探索，ERVs在CD8+T细胞活化和不同记忆性CD8+T细胞亚群分化过程中的调控机制。
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