摘要
目的:RAB7A(RAS-related in Brain 7A)是 RAS 致癌基因家族的重要成员。然而，RAB7A与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的发生发展及免疫浸润的相关性研究较少。在这里，我们通过生物信息学分析、真实队列验证和体外实验探索，研究了 RAB7A在HCC中的潜在作用。 方法:(1)生物信息学分析:通过肿瘤基因组图谱数据库(The cancer genome atlas,TCGA)和人类蛋白图谱数据库(Human Protein Atlas，HPA)分析RAB7A的表达水平和临床分期。通过R语言survival包和PROC包综合评估RAB7A的预后和诊断价值。利用TISIDB,TISCH和R语言ESTIMATE包分析RAB7A与肿瘤免疫微环境的相关性。STRING数据库获取蛋白互作网络图。R语言ClusterProfiler包用来执行功能富集分析。(2)体外实验验证:实时荧光定量PCR(quantitative Real-Time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印迹法(western blotting,WB)检测相关分子的mRNA和蛋白水平表达。EdU和CCK8实验用来检测细胞增殖能力。采用划痕愈合实验和transwell实验检测细胞侵袭转移能力。流式细胞仪检测细胞周期分布及活性氧含量。采用双色免疫荧光染色鉴定上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。免疫组化实验评价RAB7A与免疫检查点的相关性。 结果:RAB7A在大多数肿瘤中表达上调并与患者的不良预后相关。肿瘤免疫微环境(tumor immune microenvironment，TIM)分析结果显示，RAB7A在大多数肿瘤中与巨噬细胞和癌症相关成纤维细胞(cancer associated fibroblasts,CAFs)的浸润呈显著正相关，而与 M2型巨噬细胞呈负相关。单细胞图谱还揭示了 RAB7A在免疫细胞中的分布和比例。体外细胞学实验提示，RAB7A通过PIK3CA-AKT通路调控细胞周期进程，进而影响肝癌细胞增殖。不仅如此，RAB7A通过促进EMT调节肝癌细胞的侵袭转移能力。真实世界队列研究表明，RAB7A的表达水平与TGFBR1和PD-L1的表达水平呈正相关。 结论:RAB7A可能作为一种潜在的肿瘤预后和免疫浸润相关的生物标志物，预测某些癌症类型的免疫治疗效果，特别是在HCC中。此外，RAB7A是参与HCC恶性进展的多通路靶点。
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