摘要
荔枝是为数不多富含A型原花青素的水果之一，在其生长过程中会掉落大量的荔枝落果副产物。本研究以自然掉落的荔枝生理落果（简称荔枝落果）为原料，对5个品种荔枝在3个不同阶段掉落的生理落果和成熟果皮中的原花青素进行结构鉴定，并对其生物活性进行评价。在此基础上，通过分离纯化得到高纯度的A型低聚原花青素，使用荔枝类甜蛋白（Litchithaumatin-likeprotein，LcTLP）建立巨噬细胞系RAW264.7炎症模型对A型低聚原花青素的抗炎活性及机制进行探讨。主要研究结果如下： （1）5个品种落果中总酚含量均高于熟果皮，约是成熟果皮的1.3~2.2倍。荔枝落果中原花青素含量也远高于熟果皮，且A型低聚原花青素在荔枝落果阶段可以稳定存在，但在荔枝成熟后大幅减少。而不同品种的荔枝落果在同一时期原花青素成分基本一致，但各原花青素含量却会有一定的变化。在荔枝落果及熟果皮提取物中共鉴定出11种原花青素，其中包括原花青素A2、原花青素A4、1个A型二聚体、2个A型三聚体和1个A型四聚体。其中怀枝具有较高的单体（53.97mg/gDW）和A型二聚体（40.35mg/gDW）含量，而第三批自然掉落的白糖罂落果富含A型三聚体（26.01mg/gDW），妃子笑落果富含A型四聚体（16.54mg/gDW）。 （2）各荔枝落果及熟果皮提取物均表现出良好的体外抗氧化、抗炎和抗增殖活性，且A型原花青素三聚体更有利于抗炎活性。其中怀枝品种第三批落果表现出最佳的体外抗氧化活性（IC50：0.208；FRAP：514.58μmolTE/L），而第二和第三批荔枝落果均表现出较强的抗炎和抗增殖活性，此外，经主成分和皮尔逊相关性分析，荔枝落果中的单体和A型原花青素三聚体分别与抗氧化（rgt;0.72；Plt;0.01）和抗炎（r=0.53；Plt;0.05）活性呈显著正相关。 （3）A型低聚原花青素分离纯化及体外抗炎活性实验表明：经AB-8大孔树脂纯化及制备液相分离第三批白糖罂落果提取物得到的PR-2组分中原花青素A2、A型三聚体和四聚体含量分别为65.35%、12.25%和11.09%，A型低聚原花青素纯度高达88.69%。在120μg/mL浓度下，PR-2能够显著抑制LcTLP刺激导致的一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-6（IL-6）的分泌，抑制率分别可达58.38%、86.31%和39.80%。蛋白免疫印迹分析表明，在相同浓度下PR-2可降低53.44%诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和36.69%环氧合酶2（COX-2）的表达量，并显著降低p-65、IκBα、JNK、ERK和p-38的磷酸化水平。因此，PR-2能够通过MAPK和NF-κB通路有效抑制LcTLP诱导的炎症。
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