摘要
目的：观察脑缺血再灌注（cerebralischemiareperfusion,CIR）后大鼠缺血灶周边脑组织不同时间点神经血管单元（neurovascularunit,NVU）超微结构变化及相关的神经核抗原（neuronalnuclearantigen,NeuN）、胶质纤维酸性蛋白（glialfibrillaryacidicprotein,GFAP）和层粘连蛋白（laminin,LN）在不同时间点的表达变化，探讨三七总皂苷（panaxnotoginsengsaponins,PNS）对脑缺血后大鼠脑组织NVU超微结构及相关蛋白表达的影响，进一步阐明PNS对脑缺血具有保护作用。 方法：（1）雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组3组，各组分别又按脑缺血再灌注后24h、72h、7d、3w分为4个亚组，每亚组大鼠12只。采用线栓法制作局灶性大脑中动脉闭塞（middlecerebralarteryocclusion,MCAO）模型。采用Longa法评分标准检测各组大鼠术后4h神经功能评分，随之各组进行干预，分别在缺血再灌注后24h、72h、7d、3w进行神经功能评分。（2）应用蛋白质印迹（westernblot,WB）法检测神经血管单元各组分相关蛋白NeuN、GFAP和LN的表达变化。（3）透射电镜下观察各组大鼠缺血灶周边脑组织不同时间点的NVU超微结构变化。 结果：（1）神经功能评分：干预前即术后4h治疗组和模型组神经功能评分比较无明显差异；PNS干预后治疗组大鼠神经功能评分逐渐改善，缺血再灌注后24h与模型组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），再灌注72h、7d、3w的大鼠神经缺损评分与同时间点模型组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。（2）大鼠MCAO模型脑肉眼直观图：IR3w模型组可见明显脑梗死灶，脑皮质区表面苍白肿胀，梗死中心区可有不同程度脑组织萎缩，血管分支少，细小，走行不清；治疗组脑皮质区表面苍白不明显，组织肿胀较模型组轻，脑缺血梗死中心区较模型组缩小，血管分布较模型组丰富，分支多，走行清晰可见。（3）NeuN、GFAP和LN蛋白印迹结果：假手术组NeuN、GFAP、LN蛋白各时间点表达均无明显改变。模型组NeuN蛋白各时间点表达均低于假手术组，其中IR24h、7d、3w表达与假手术组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗组NeuN的表达量逐渐升高，各时间点表达量均高于模型组，在IR72h后基本接近正常，其中7d、3w与同时间点模型组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。模型组GFAP蛋白相对表达量逐渐增加，相对假手术组仍低，各时间点的GFAP表达量与假手术组相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；治疗组各时间点相对表达量较模型组升高，IR72h、7d、3w表达相比模型组差异有统计学意义（P＜0.05），至IR7d后，治疗组GFAP蛋白表达基本接近正常。模型组LN表达量逐渐增加，各时间点仍低于假手术组，24h、72h、7d相比假手术组差异有统计学意义（P＜0.05），而3w与假手术组相比较差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗组各时间点LN蛋白表达量较模型组升高，其7d、3w表达与模型组相比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。（4）电镜观察发现再灌注24h、72h、7d、3w治疗组大鼠脑组织NVU超微结构的病理形态损伤均较同时间点模型组明显减轻。 结论：（1）PNS对脑缺血后NVU的保护作用，可能与上调脑缺血后NeuN、GFAP、LN蛋白表达有关。（2）PNS能同时减轻脑缺血后NVU损伤的病理形态变化。（3）PNS可通过整合促进脑缺血后NVU的神经元、胶质细胞和微血管的修复，改善神经功能缺损症状，对脑缺血具有保护作用。
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