摘要
近年来，随着抗生素耐药性的不断上升，多重耐药细菌正逐渐威胁全球公共卫生安全健康，为此必须寻找新的治疗手段对抗多重耐药细菌。抗生素和噬菌体联合使用与单一的抗生素治疗或者噬菌体治疗相比，具有更好的临床效果，且能降低多重耐药细菌对某一抗生素的敏感性。抗生素和噬菌体联合使用也会产生协同作用、拮抗作用、相加作用和无关作用。值得注意的是，多种因素会影响抗生素和噬菌体联合治疗的效果。 本文从广东肇庆某鸭场采集污水样品，成功分离鉴定出2株鸭场水源裂解性噬菌体，并对噬菌体进行了宿主谱、透射电镜观察、一步生长曲线、最佳感染复数、热稳定性、pH稳定性等生物学特性实验。结果显示，在最佳感染复数实验中，噬菌体vB_EcoM-P1的最佳感染复数为0.01，噬菌体vB_EcoM-P2的最佳感染复数为0.1。在一步生长曲线实验中，噬菌体vB_EcoM-P1感染宿主菌后的潜伏期约为30min，裂解期约为40min，裂解量大约为8.7PFU/cell；噬菌体vB_EcoM-P2感染宿主菌后的潜伏期约为40min，裂解期约为50min，裂解量大约为35.2PFU/cell。在用65株51种不同ST型的大肠杆菌测定噬菌体的宿主谱实验中，噬菌体vB_EcoM-P1对大肠杆菌的裂解率达到38%，噬菌体vB_EcoM-P2对大肠杆菌的裂解率达到27%。 对2株大肠杆菌噬菌体进行全基因组测序后，噬菌体vB_EcoM-P1的基因组全长为81944bp，GC含量为43.8%；噬菌体vB_EcoM-P2基因组全长为52524bp，GC含量为46.1%。噬菌体基因结构均较为完整，由结构蛋白模块、DNA复制与调控蛋白模块、包装蛋白模块、裂解蛋白模块和假定蛋白模块5部分组成。通过噬菌体全基因组比对和基因组分析，2株噬菌体在NCBI数据库中均能找到同源性较高的噬菌体。 为探讨影响抗生素与噬菌体联合治疗的因素，从抗性基因、抗生素作用机制和宿主菌的噬菌体抗性等角度来综合评估这些因素对噬菌体-抗生素联合治疗的影响。实验结果表明，在将含有mcr-1基因的质粒转入宿主菌GFQ9D130M后，噬菌体和黏菌素联合治疗产生的协同效果变为拮抗效果；不同的作用机制的抗生素如磷霉素、恩诺沙星、卡那霉素与噬菌体联用的结果差异显著，即使是同一机制下的不同抗生素，如庆大霉素和卡那霉素、美罗培南和头孢他啶依旧会影响噬菌体-抗生素联合治疗的结果，在分离出已经对噬菌体产生抗性的宿主菌后，噬菌体-抗生素联合使用对宿主菌的结果没有意义。 综上所述，本文首先分离鉴定出2株裂解性噬菌体，生物学特性稳定，潜伏期短，噬菌体vB_EcoM-P2能与多种抗生素组合产生协同效果，同时，耐药质粒的转入会影响抗生素和噬菌体联合使用的结果；不同的作用机制的抗生素，即使相同机制但细微差异的抗生素依旧会对联合作用产生影响；黏菌素只有同步与噬菌体混合处理才能延缓或者减少宿主菌对噬菌体抗性的产生，对已经产生噬菌体抗性的细菌没有意义。
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