摘要
为缓解水产养殖中抗生素滥用造成的一系列后果，本试验探究使用嗜水气单胞菌（Aeromonashydrophila）诱导黑水虻（Hermetiaillucens）幼虫产生抗菌肽，并利用富含抗菌肽的黑水虻幼虫替代饲粮中部分鱼粉饲喂鲤鱼，考察其对鲤鱼幼鱼生长性能、免疫能力的影响及其机制。试验采用针刺浸泡和饥饿饲喂的方法处理黑水虻5龄幼虫，诱导其产生抗菌肽，使用滤纸片法检测抗菌肽抑菌活性。对有嗜水气单胞菌残留的黑水虻幼虫进行不同方式灭菌处理，再将彻底灭菌并且抑菌活性最好组别的黑水虻幼虫制成虫粉，替代饲粮中的鱼粉制成四种试验饲料，替代比例为0（对照组）、10%（T1组）、20%（T2组）、30%（T3组）。实验选取初重50±2g的健康鲤鱼（Cyprinuscarpio）240尾，随机分为4组，每组3个重复，每个重复20尾。分别饲喂四种试验饲料，饲喂30d后，对其进行生长性能、免疫功能、肠道菌群等指标的测定，结果表明： （1）不同方式诱导黑水虻幼虫产生的抗菌肽对嗜水气单胞菌均有抑菌活性，但活性存在明显差异。所有诱导方式中，饥饿饲喂混有效浓度为6.9×107cell/g的嗜水气单胞菌菌液的饲料72h，抑菌圈直径为1.9150±0.2358cm。饲喂灭活菌液组的诱导效果最差。高温灭菌组80℃水浴1h和100℃水浴1h能完全灭菌，但均降低了抗菌肽的抑菌活性，80℃水浴1h灭菌处理的抗菌肽抑菌活性最强，抑菌圈直径为1.8917±0.2084cm。 （2）T2组的增重率显著高于对照组（P＜0.05），T1组和T3组也高于对照组，但无显著差异（P＞0.05）。T2组和T3组鲤鱼的特定生长率显著高于对照组（P＜0.05），T1组也高于对照组，但无显著差异（P＞0.05）。各替代组的饵料系数均低于对照组，T2组和T3组与对照组有显著差异（P＜0.05）。T2组和T3组gh和igf-1基因表达量显著高于对照组（P＜0.05），T1组也高于对照组，但无显著差异（P＞0.05）。igf-1基因表达量随替代比例增加呈递增趋势，且各组间差异均显著（P＜0.05）。各组鲤鱼肥满度、肠长指数、肠重指数、脾脏指数无明显差异（P＞0.05）。上述试验结果表明，使用黑水虻幼虫替代10~30%鱼粉，能促进鲤鱼生长。 （3）各组间总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、总抗氧化能力均无显著差异（P＞0.05）。各试验组血浆溶菌酶含量均高于对照组，T3组显著高于对照组（P＜0.05）。T2组和T3组血浆酸性磷酸酶活性显著高于对照组（P＜0.05），T1组也高于对照组，但无显著差异（P＞0.05）。T2组和T3组tlr4和myd88基因表达量显著高于对照组（P＜0.05），各试验组tlr2基因表达量均显著高于对照组（P＜0.05）。使用嗜水气单胞菌对各组鲤鱼进行攻毒，各试验组死亡率均显著低于对照组（P＜0.05），且随着替代比例的增加，死亡率呈下降趋势。上述试验结果表明，使用黑水虻幼虫替代饲粮中10~30%的鱼粉，可显著增强鲤鱼的免疫能力，降低其感染嗜水气单胞菌的死亡率。 （4）各试验组鲤鱼肠道大肠杆菌和沙门氏菌数量均显著低于对照组（P＜0.05），其中T2组和T3组肠道内几乎没有沙门氏菌。各试验组芽孢杆菌数量无显著差异（P＞0.05）。各替代组乳酸杆菌、双歧杆菌数量均显著高于对照组（P＜0.05），且随着替代比例的增加呈上升趋势。上述结果表明，使用黑水虻幼虫替代10~30%鱼粉能显著增加鲤鱼肠道内有益菌的数量，降低有害菌的数量。 综上所述，饥饿饲喂嗜水气单胞菌能够高效诱导黑水虻幼虫产生抗菌肽；对残余嗜水气单胞菌80℃水浴1h灭菌处理的效果最好；在饲粮中添加富含抗菌肽的黑水虻幼虫替代鱼粉，可优化鲤鱼肠道菌群，提高生长性能，增强免疫力，降低饵料系数和感染嗜水气单胞菌的死亡率。
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