摘要
研究背景与目的： 肺癌是我国发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。免疫治疗是近年来的研究热点，程序性细胞死亡蛋白1（programmedcelldeath1，PD-1）/程序性细胞死亡蛋白配体1（programmedcelldeathligand1，PD-L1）免疫检查点抑制剂目前已经成为晚期非小细胞肺癌的标准治疗之一。然而，对于存在表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR）突变的晚期非小细胞肺癌患者来说，他们接受免疫检查点抑制剂治疗时效果不甚理想，因此，酪氨酸激酶抑制剂（tyrosinekinaseinhibitors，TKIs）仍是其标准一线治疗方案。但是，大部分患者经TKIs治疗后都不可避免地发生耐药，而对于耐药后的患者，经典治疗方案是含铂全身化疗，但疗效欠佳。近年来，CD73作为一种免疫负向调控分子，已经成为研究热点，研究表明，CD73高表达与多种癌症的不良预后有关，并且与抑制性肿瘤微环境有关，CD73/腺苷途径是潜在的肿瘤治疗靶点。但是，针对CD73在EGFR突变肺腺癌中的表达及其与EGFR突变肺腺癌肿瘤微环境关系的文献报告目前仍十分稀少。 因此，本研究着重探索CD73在EGFR突变肺腺癌患者中的表达、表达水平对患者预后的影响、与肿瘤微环境的关系及其介导途径，同时研究CD73在患者基线肿瘤组织和TKIs治疗耐药后组织的动态变化，旨在了解CD73能否成为EGFR突变肺腺癌患者的潜在治疗靶点，能否为TKIs耐药后的肺腺癌患者的治疗选择提供新线索。 研究方法： 第一部分利用公共数据库探索CD73mRNA在EGFR突变的、EGFR野生的肺腺癌以及EGFR突变的肿瘤邻近正常组织中的表达情况，并研究其与EGFR突变的肺腺癌患者的生存预后、临床病理因素、肿瘤微环境和免疫检查点等的关系以及探索CD73介导的信号通路。同时利用免疫组织化学染色技术对临床上收集的42例EGFR突变的晚期肺腺癌和40例EGFR野生的晚期肺腺癌患者的病理组织样本进行CD73蛋白检测，并对EGFR突变的患者进行CD8、Foxp3、PD-L1蛋白检测，从而在蛋白水平上探索CD73在EGFR突变的晚期肺腺癌中的表达情况以及对肿瘤免疫微环境的影响。 第二部分利用免疫组织化学染色技术对临床上收集的26例经TKIs治疗后发生耐药的EGFR突变晚期肺腺癌患者的基线以及耐药后的病理组织样本进行CD73、CD8、Foxp3以及PD-L1蛋白检测，同时探索CD73蛋白表达在基线和在一、二、三代TKIs治疗耐药后组织中的动态变化，以及CD73与耐药后的肿瘤微环境中的CD8、Foxp3和PD-L1的关系。 结果： 1.癌症基因组图谱（TheCancerGenomeAtlas，TCGA）公共数据分析显示：对比EGFR野生型肺腺癌，CD73mRNA在EGFR突变的肺腺癌中存在更高的表达，并且表达水平与EGFRmRNA呈显著正相关。CD73mRNA的高表达是EGFR突变的肺腺癌的独立不良预后因素，高表达组的肺腺癌患者与更短的无疾病进展生存期（Progression-FreeSurvival，PFS）和总生存期（OverallSurvival，OS）有关。在EGFR突变的肺腺癌中，高表达的CD73与更低的微卫星不稳定性（microsatelliteinstability，MSI）、更高的缺氧分数密切相关；CD73mRNA的表达与CD8+T淋巴细胞、自然杀伤细胞和髓样树突状细胞的浸润水平具有显著负相关性，与肿瘤相关成纤维细胞的浸润水平具有显著正相关性；CD73mRNA表达与患者的年龄、性别、肿瘤分期、肿瘤突变负荷无明显相关性。CD73在EGFR突变的肺腺癌中可能通过介导磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol3-kinase，PI3K）/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶（protein-serine-threoninekinase，AKT）、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase，MAPK)等常见的致癌通路促进肿瘤的发生、发展以及抑制性肿瘤微环境的形成。 2.免疫组织化学染色结果显示：CD73蛋白在EGFR突变的晚期肺腺癌肿瘤细胞上的表达水平显著高于肿瘤细胞周围组织，同时CD73蛋白在EGFR突变晚期肺腺癌中的高表达率（染色评分≥50%）高于EGFR野生型晚期肺腺癌。在EGFR突变的晚期肺腺癌中CD73的蛋白表达与患者年龄、性别、吸烟史、肿瘤分期无明显相关性。在EGFR突变的晚期肺腺癌基线病理组织中，CD73蛋白高表达组肿瘤中的CD8蛋白表达水平显著低于低表达组，而在TKIs耐药后肿瘤组织中的CD73蛋白表达与肿瘤中的PD-L1表达显著正相关。 结论： CD73可以作为EGFR突变型肺腺癌的生存预后标志物，对比EGFR野生型肺腺癌，CD73在EGFR突变型肺腺癌患者上具有更高的表达。CD73促进EGFR突变型肺腺癌抑制性肿瘤微环境的形成可能与加剧缺氧微环境、降低微卫星不稳定性以及介导PI3K/AKT、MARK等信号通路有关。因此，高表达的CD73是EGFR突变的肺腺癌患者潜在的治疗靶点，对于TKIs耐药后的肺腺癌，通过联合CD73抗体可能能够逆转抑制性肿瘤微环境，进而增强免疫检查点抑制剂的治疗疗效。
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