摘要
目的：探讨不同干预措施对大鼠慢性难愈合创面细胞焦亡相关因子Caspase-1和IL-18表达的影响，完善皮肤再生医学技术在慢性难愈合创面中的作用机制，为临床应用及推广提供更多的理论依据。 方法：（1）取健康成年SPF级Wistar雄性大鼠90只，12周龄，体重220g～250g，适应性喂养1周后，随机分为：空白组（Blank）、急创组(Acute）、美宝组（MEBO）、贝复济组（rb-bFGF)、模型组（Model），每组18只。其中空白组仅做背部脊柱两侧备皮处理，急创组直接进行背部皮肤剪除，建立急性损伤模型，并湿敷生理盐水纱布，其余三组大鼠制备慢性难愈合创面模型，分别用湿润烧伤膏、贝复济，生理盐水湿敷创面治疗。造模后第3、7、14天分别切取创面肉芽组织，部分置于甲醛液及电镜液中固定，待病理HE染色，免疫荧光及电镜实验时取用。其余创面标本置于-80℃冰箱，用于WesternBlotting和Real-TimePCR检测，对比各组大鼠创面IL-18及Caspase-1蛋白表达情况及mRNA转录水平。 结果：（1）创面愈合情况：治疗后第3天，各组大鼠创面愈合率比较差异无统计学意义(P＞0.05)；治疗后第7天和第14天，急创组、贝复济组、美宝组大鼠创面愈合率和模型组比较均明显升高(P＜0.05)，美宝组与贝复济组比较无差异(P＞0.05)。急创组在第14天愈合效果最好。（2）HE染色情况：急创组、贝复济组、美宝组的组织形态学结构均优于模型组。（3）电镜观察情况：电镜观察显示模型组、美宝组中均存在细胞胀大、细胞破损、胞液稀疏、着色较浅、胞膜不连续，膜孔形成的细胞焦亡特征。（4）免疫荧光染色结果：Caspase-1在造模后第3天的急性组、贝复济组、美宝组，模型组中均有不同程度表达，其中模型组表达明显；造模后第7天和第14天，其余各组表达均明显减少，而模型组相对其他组仍然明显表达。（5）WesternBlotting和Real-TimePCR检测情况：①治疗后第3、7、14天，空白组各时间点IL-18蛋白表达水平无明显变化，P＞0.05，差异无统计学意义；急创组、贝复济组、美宝组、模型组：大鼠创面组织内IL-18蛋白表达水平先升高后降低；各组对比情况：第3天：空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异P＜0.05，急创组、贝复济组、美宝组两两比较无统计学差异。第7天：空白组、模型组分别和其余四组比较有统计学差异，急创组、贝复济组、美宝组组间两两比较无统计学差异。第14天：空白组和急创组比较无统计学差异P＞0.05，空白组和美宝组比较，空白组和贝复济组比较，空白组和模型组比较均有统计学差异P＜0.05。模型组和其余四组比较均有统计学差异P＜0.05。急创组、贝复济组、美宝组组间两两比较无统计学差异P＞0.05。其中模型组在第14天时表达水平为各组最高，急创组表达水平除空白组外最低。IL-18mRNA转录水平趋势大体和IL-18蛋白表达一致。②治疗后第3、7、14天，空白组各时间点Caspase-1蛋白表达水平无明显变化，P＞0.05，差异无统计学意义；模型组各时间点Caspase-1蛋白表达水平无明显变化，差异无统计学意义（P＞0.05）；急创组，贝复济组，美宝组第14天较第7天下降，差异有统计学意义（P＜0.05）；各组对比情况：第3天：空白组、模型组和其余四组比较均有统计学差异P＜0.05，急创组、贝复济组、美宝组组间两两比较无统计学差异P＞0.05。第7天：空白组、模型组和其余四组比较均有统计学差异，急创组、贝复济组、美宝组组间两两比较无统计学差异P＞0.05。第14天：空白组和急创组、美宝组、贝复济组比较均无统计学差异P＞0.05。其中模型组在第14天时表达水平为各组最高，和其余四组比较均有统计学差异P＜0.05。Caspase-1mRNA转录结果呈现的趋势大体上和Caspase-1蛋白表达水平一致。 结论：(1)MEBT/MEBO可减少大鼠慢性难愈合创面组织中Caspase-1/IL-18的表达，减少炎症反应，促进慢性难愈合创面的愈合，愈合过程涉及创面细胞焦亡。（2）MEBT/MEBO对慢性创面的愈合效果与使用贝复济作用相当，可能与MEBO含有多种抗炎成分，抑制促炎因子的释放有关。
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