摘要
目的 探讨骨质疏松症（Osteoporosis，OP）与非酒精性脂肪肝病（Non-alcoholicfattyliverdisease，NAFLD）脂代谢之间的相关性以及抗疏健骨（KSJG）颗粒改善OP同机制下NAFLD作用及机制。 方法 1.临床研究。依据纳排标准，在湖南省常德市人民医院随机抽取研究对象261例，根据骨质疏松症T评分分为2组，即OP患者（123例）和非OP患者（138例），收集2组骨密度、血脂、肝功能等指标，进行相关性分析。 2.体内实验。将60只3-4个月雌性SD大鼠随机分6组，即对照组（生理盐水/d）、模型组（生理盐水/d）、低（0.287g/kg/d）、中（0.573g/kg/d）、高（1.146g/kg/d）药物干预组及淫羊藿苷组（0.573g/kg/d）。除对照组外各组行双侧卵巢切除术，建立骨质疏松症同机制下的NAFLD模型，腹主动脉取血后处死，取肝组织行HE染色；生化检测脂代谢指标；WesternBlot检测自噬及相关通路蛋白。 3.体外实验。使用游离脂肪酸（Freefattyacid，FFA）溶液（油酸：棕榈酸=2:1）诱导人肝L02细胞中的脂质积累，建立高脂肪细胞模型。分别使用AMPK抑制剂（CompoundC）、KSJG颗粒含药血清和非诺贝特（Fenofibrate，FF）含药血清进行干预。将细胞分为6组，即BSA对照组、FFA模型组、FFA+CompoundC组、FFA+KSJG组、FFA+FF阳性对照组及FFA+KSJG+CompoundC组。通过油红O染色与BODIPY493/503荧光染色检测细胞脂质累积；生化检测细胞脂代谢及肝功能指标；WesternBlot检测自噬及相关通路蛋白。 结果 临床研究。①单因素分析：OP组年龄、体重、体质指数（BMI）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）明显高于非OP组，而身高低于非OP组（Plt;0.05）；②相关性分析：BMD与年龄呈负相关；OP组BMD与BMI、TC和TG负相关，与ALT正相关（Plt;0.05）；③Logistic回归分析：年龄、BMI、TC和TG是OP的危险因素（Plt;0.05）。 体内实验。①一般情况：与对照组相比，模型组大鼠体重、肝湿重和肝指数升高显著，KSJG颗粒低、中、高剂量组和淫羊藿苷组均可降低肝湿重和肝指数，并有效控制体重。②形态学：HE染色显示，与对照组相比，模型组大鼠肝细胞索紊乱，肝细胞肿胀，可见明显的泡状脂肪变性；与模型组比较，低、中、高剂量组和淫羊藿苷组大鼠肝细胞脂肪变性程度明显改善；③生化检测：与对照组相比，模型组TG、TC、LDL-C水平上升，HDL-C水平下降，与模型组相比，中、高剂量和淫羊藿苷组可逆转这一现象（Plt;0.05）；④WesternBlot检测：与对照组相比，模型组自噬标志蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Atg7和Beclin1水平降低，p62水平升高，KSJG颗粒中、高剂量组和淫羊藿苷组可逆转这一现象（Plt;0.05）；与对照组相比，模型组p-Akt、p-mTOR、p-ULK1（Ser757）水平升高，而p-AMPK和p-ULK1（Ser555）水平降低（Plt;0.05），KSJG低、中、高剂量组和淫羊藿苷组可逆转这一现象（Plt;0.05）。 体外实验。①生化检测：与BSA组相比，FFA组TG、ALT和AST水平显著升高，FFA+KSJG和FFA+FF组均降低（Plt;0.05）；②油红O染色和BODIPY染色：FFA组较BSA组LD数量增多，FFA+CompoundC组脂质累积进一步增多，FFA+KSJG和FFA+FF组可明显减少脂滴含量，抑制AMPK后，KSJG降低脂代谢效应降低（Plt;0.05）。③WesternBlot检测：与BSA相比，FFA组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Atg7和Beclin1水平降低，p62水平升高，AMPK抑制后自噬蛋白水平进一步降低。与FFA相比，FFA+KSJG和FFA+FF组可升高LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Atg7和Beclin1水平，降低p62水平，抑制AMPK后，KSJG提高自噬水平效应降低（Plt;0.05）。与BSA组相比，FFA组p-Akt、p-mTOR、p-ULK1（Ser757）表达增加，p-AMPK和p-ULK1（Ser555）水平降低，抑制AMPK后，趋势更显著；与FFA相比，FFA+KSJG和FFA+FF组可显著降低p-mTOR和p-ULK1（Ser757）水平，升高p-AMPK和p-ULK1（Ser555）水平，抑制AMPK后，KSJG升高p-AMPK和p-ULK1（Ser555）效应降低（Plt;0.05）。 结论 1.骨质疏松症与非酒精性脂肪肝病相关脂代谢指标呈负相关； 2.双侧卵巢切除术可同时引起骨质疏松症与非酒精性脂肪肝病，抗疏健骨颗粒可改善非酒精性脂肪肝病脂代谢紊乱； 3.抗疏健骨颗粒可激活AMPK/ULK1（Ser555）通路，改善非酒精性脂肪肝病脂代谢紊乱。
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