摘要
喜树碱(CPT)是一种吲哚类生物碱，是从珙桐科喜树里提取的天然化学产物，羟基喜树碱(HCPT)是喜树碱的羟基衍生物，与喜树碱具有相似作用功效，但毒性相对弱小，具备治疗肝癌、头颈癌、乳腺癌等作用。HCPT难溶于水，普通制剂肿瘤靶向性低，限制了药物的充分应用。本课题将羟基喜树碱制备成iRGD肽-羟基喜树碱纳米晶(iRGD肽-HCPT纳米晶)，并考察其肿瘤靶向性，以期提高肿瘤部位药物浓度，改善药物吸收，增强药物抗肿瘤效果，为羟基喜树碱靶向制剂的发展提供依据。 本课题探索了高效液相色谱(HPLC)分析方法，进行药物溶出度和含量测定。经方法学验证，所建立的分析方法准确、可靠，符合试验要求。 制备工艺选择介质研磨法，以泊洛沙姆F-127为稳定剂制备HCPT纳米晶。以粒径和PDI为检测指标，单因素考察研磨时间、研磨珠用量、主药浓度、稳定剂用量、研磨转速，优选HCPT纳米晶制备工艺。优选的工艺：HCPT为10mg/mL，泊洛沙姆F-127为9mg，水为15mL，研磨珠为25g(φ=0.1mm的氧化锆珠)，研磨速度为150r/min，研磨时间为4h。 本课题对HCPT纳米晶进行了表征。其外观为淡黄色混悬液；平均粒径为94±3nm，PDI为0.201±0.006，平均Zeta电位为-5.14mV；经由扫描电镜观察粒子形态为块状晶体，研磨后粒径显著减小；用红外光谱法、X-射线粉末衍射法和差示扫描量热法分析药物晶型和化学结构，纳米化前后无明显变化；用透析袋法测定纳米晶的溶出度，HCPT纳米晶相较于原料药和物理混合物溶出更高更快；对三批自制的HCPT纳米晶进行含量测定，平均含量为98.76%，RSD为0.17%。 在以上研究基础上，进行iRGD肽-HCPT纳米晶的制备。先对泊洛沙姆F-127进行羧基化；再采用优化的工艺，制备以羧基化泊洛沙姆F-127为稳定剂的HCPT纳米晶，通过与泊洛沙姆F-127为稳定剂制备的HCPT纳米晶做对比，粒子粒径、PDI、Zeta电位和形态没有明显变化；再进一步将HCPT纳米晶与iRGD肽偶联，即得iRGD肽-HCPT纳米晶。制备的iRGD肽-HCPT纳米晶为块状粒子，粒径为112nm，PDI为0.236，Zeta电位为1.77mV，含量为98.91%。 采用HPLC法分别测定Balb/c雌性小鼠心、肝、脾、肺、肾、肿瘤组织中药物浓度。方法学研究表明，药物提取回收率为80%~90%，仪器精密度RSDlt;5%，日内、日间精密度RSD均lt;10%，符合试验要求。建立小鼠乳腺癌4T1肿瘤模型，以腹腔注射给药后的组织分布、生存曲线、体重曲线、肿瘤体积以及癌细胞增殖抑制和癌细胞摄取实验为考察项目，对iRGD肽-HCPT纳米晶的靶向性进行评价。 荷瘤小鼠腹腔注射相同药物剂量后，HCPT注射液主要分布于肝脏，而iRGD肽-HCPT纳米晶和HCPT纳米晶在肿瘤和肝脏中分布较多；肿瘤部位iRGD肽-HCPT纳米晶组AUC0-∞分别是HCPT纳米晶组和市售HCPT注射液组的1.59倍和18.22倍，MRT分别是1.61倍和2.34倍；iRGD肽-HCPT纳米晶和HCPT纳米晶肿瘤靶向性参数Re均显著大于其他组织，且前者是后者的1.59倍；iRGD肽-HCPT纳米晶肿瘤Te值分别较HCPT纳米晶、HCPT注射液高1.34倍和4.43倍。实验结果表明，相较于HCPT纳米晶，iRGD肽-HCPT纳米晶在肿瘤靶向性和滞留时间方面显示出更强的优势，而HCPT注射液对肿瘤未显示出明显的靶向性。 相同给药剂量(4mg/kg)时，与HCPT纳米晶组和注射液组相比，iRGD肽-HCPT纳米晶组荷瘤小鼠的生存期较长，体重较高，抑制肿瘤增长的效果较好；iRGD肽-HCPT纳米晶比HCPT纳米晶进入细胞的药物量更多，对癌细胞毒性更大，杀伤力更强。 实验结果表明，iRGD肽-HCPT纳米晶不但提高了药物的肿瘤靶向性，还能提升药物进入肿瘤细胞的渗透性，优于HCPT纳米晶和HCPT注射液。
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